中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2009年
4期
327-332
,共6页
张宁%李茂宁%侯韶毅%兰家暖%谢丽华%黄伟坚%冯励%韦英益%刘芳%李军
張寧%李茂寧%侯韶毅%蘭傢暖%謝麗華%黃偉堅%馮勵%韋英益%劉芳%李軍
장저%리무저%후소의%란가난%사려화%황위견%풍려%위영익%류방%리군
猪圆环病毒2型%ORF2截短基因%真核表达%重组质粒%免疫效果
豬圓環病毒2型%ORF2截短基因%真覈錶達%重組質粒%免疫效果
저원배병독2형%ORF2절단기인%진핵표체%중조질립%면역효과
为研究猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2截短基因片段核酸疫苗的免疫效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,用PCR方法扩增出ORF2基因及其截短基因共8个片段[A(ORF2)、B(51～100 aa)、C(101～150 aa)、D(181～235 aa)、E(151～200 aa)、F(51～150 aa)、G(101～235 aa)、H(51～235 aa)],将其插入pcD-NA3.0栽体中,成功构建了pcDNA-A、pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G、pcDNA-H.将纯化后的真核表达质粒转染PK-15细胞后,用间接免疫荧光试验检测各个质粒在细胞中的瞬时表达情况.分别用单独免疫和组合免疫的方法免疫小鼠,每只0.15 mg,用ELISA试剂盒检测小鼠血清中的抗体效价,并分析这两种方法的免疫效果.结果显示,6个片段较短的重组质粒(pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G)转染的细胞中均有明显且较亮的荧光出现,而2个片段较长的重组质粒(pcDNA-A、pcDNA-H)及空载体pcDNA3.0转染的细胞中没有荧光出现.在单独免疫组中,这8个片段的真核表达质粒都能刺激机体产生特异性抗体,其中片段较短的pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E的免疫效果比较理想;在组合免疫中,除pcDNA-C-F外,各个真核表达质粒都能产生较高水平且稳定的抗体,其中pcDNA-D-H、pcDNA-B-F的免疫效果最好.表明组合免疫要比单独免疫的效果好.
為研究豬圓環病毒2型(PCV-2)ORF2截短基因片段覈痠疫苗的免疫效果,以PCV-2 GXWZ-1株為模闆,用PCR方法擴增齣ORF2基因及其截短基因共8箇片段[A(ORF2)、B(51～100 aa)、C(101～150 aa)、D(181～235 aa)、E(151～200 aa)、F(51～150 aa)、G(101～235 aa)、H(51～235 aa)],將其插入pcD-NA3.0栽體中,成功構建瞭pcDNA-A、pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G、pcDNA-H.將純化後的真覈錶達質粒轉染PK-15細胞後,用間接免疫熒光試驗檢測各箇質粒在細胞中的瞬時錶達情況.分彆用單獨免疫和組閤免疫的方法免疫小鼠,每隻0.15 mg,用ELISA試劑盒檢測小鼠血清中的抗體效價,併分析這兩種方法的免疫效果.結果顯示,6箇片段較短的重組質粒(pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G)轉染的細胞中均有明顯且較亮的熒光齣現,而2箇片段較長的重組質粒(pcDNA-A、pcDNA-H)及空載體pcDNA3.0轉染的細胞中沒有熒光齣現.在單獨免疫組中,這8箇片段的真覈錶達質粒都能刺激機體產生特異性抗體,其中片段較短的pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E的免疫效果比較理想;在組閤免疫中,除pcDNA-C-F外,各箇真覈錶達質粒都能產生較高水平且穩定的抗體,其中pcDNA-D-H、pcDNA-B-F的免疫效果最好.錶明組閤免疫要比單獨免疫的效果好.
위연구저원배병독2형(PCV-2)ORF2절단기인편단핵산역묘적면역효과,이PCV-2 GXWZ-1주위모판,용PCR방법확증출ORF2기인급기절단기인공8개편단[A(ORF2)、B(51～100 aa)、C(101～150 aa)、D(181～235 aa)、E(151～200 aa)、F(51～150 aa)、G(101～235 aa)、H(51～235 aa)],장기삽입pcD-NA3.0재체중,성공구건료pcDNA-A、pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G、pcDNA-H.장순화후적진핵표체질립전염PK-15세포후,용간접면역형광시험검측각개질립재세포중적순시표체정황.분별용단독면역화조합면역적방법면역소서,매지0.15 mg,용ELISA시제합검측소서혈청중적항체효개,병분석저량충방법적면역효과.결과현시,6개편단교단적중조질립(pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G)전염적세포중균유명현차교량적형광출현,이2개편단교장적중조질립(pcDNA-A、pcDNA-H)급공재체pcDNA3.0전염적세포중몰유형광출현.재단독면역조중,저8개편단적진핵표체질립도능자격궤체산생특이성항체,기중편단교단적pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E적면역효과비교이상;재조합면역중,제pcDNA-C-F외,각개진핵표체질립도능산생교고수평차은정적항체,기중pcDNA-D-H、pcDNA-B-F적면역효과최호.표명조합면역요비단독면역적효과호.
