上海交通大学学报(医学版)
上海交通大學學報(醫學版)
상해교통대학학보(의학판)
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2010年
10期
1189-1193,1216
,共6页
陈丽丽%虢灿杰%陈源文%李定国
陳麗麗%虢燦傑%陳源文%李定國
진려려%괵찬걸%진원문%리정국
BMP-7%慢病毒载体%HSC-T6
BMP-7%慢病毒載體%HSC-T6
BMP-7%만병독재체%HSC-T6
目的 构建携带大鼠BMP-7基因的慢病毒载体并实现该基因在肝星状细胞株HSC-T6中的稳定高表达,为进一步研究BMP-7的抗肝纤维化功能奠定基础.方法 从大鼠细胞基因中提取并用PCR方法扩增BMP-7目的基因,构建BMP-7重组表达载体Lenti-copGFP/puro-BMP7,脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染293TN工具细胞,包装产生慢病毒颗粒.慢病毒感染H1299细胞,根据细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达水平测定病毒滴度.将HSC-T6细胞分为空白组、空病毒对照组及BMP-7慢病毒感染组,分别用Real-Time PCR和Western blotting方法检测BMP-7 mRNA和蛋白的表达.结果 PCR扩增检测阳性菌落和测序证实,成功构建大鼠BMP-7基因重组慢病毒载体.倒置荧光显微镜下观察可见,H1299细胞呈绿色荧光,并测得病毒滴度为1×104 ifμ/μL.重组慢病毒感染HSC-T6后,Real-time PCR和Western blotting方法分别检测到BMP-7 mRNA和蛋白均稳定高表达.BMP-7慢病毒感染组与空病毒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);空病毒对照组与空白组比较,差异无统计学意义(P<0.05).结论 成功构建了带有大鼠BMP-7基因的慢病毒载体,并实现其在HSC-T6的稳定高表达.
目的 構建攜帶大鼠BMP-7基因的慢病毒載體併實現該基因在肝星狀細胞株HSC-T6中的穩定高錶達,為進一步研究BMP-7的抗肝纖維化功能奠定基礎.方法 從大鼠細胞基因中提取併用PCR方法擴增BMP-7目的基因,構建BMP-7重組錶達載體Lenti-copGFP/puro-BMP7,脂質體法將重組慢病毒載體和包裝質粒混閤物共轉染293TN工具細胞,包裝產生慢病毒顆粒.慢病毒感染H1299細胞,根據細胞綠色熒光蛋白(GFP)的錶達水平測定病毒滴度.將HSC-T6細胞分為空白組、空病毒對照組及BMP-7慢病毒感染組,分彆用Real-Time PCR和Western blotting方法檢測BMP-7 mRNA和蛋白的錶達.結果 PCR擴增檢測暘性菌落和測序證實,成功構建大鼠BMP-7基因重組慢病毒載體.倒置熒光顯微鏡下觀察可見,H1299細胞呈綠色熒光,併測得病毒滴度為1×104 ifμ/μL.重組慢病毒感染HSC-T6後,Real-time PCR和Western blotting方法分彆檢測到BMP-7 mRNA和蛋白均穩定高錶達.BMP-7慢病毒感染組與空病毒對照組比較,差異有統計學意義(P<0.01);空病毒對照組與空白組比較,差異無統計學意義(P<0.05).結論 成功構建瞭帶有大鼠BMP-7基因的慢病毒載體,併實現其在HSC-T6的穩定高錶達.
목적 구건휴대대서BMP-7기인적만병독재체병실현해기인재간성상세포주HSC-T6중적은정고표체,위진일보연구BMP-7적항간섬유화공능전정기출.방법 종대서세포기인중제취병용PCR방법확증BMP-7목적기인,구건BMP-7중조표체재체Lenti-copGFP/puro-BMP7,지질체법장중조만병독재체화포장질립혼합물공전염293TN공구세포,포장산생만병독과립.만병독감염H1299세포,근거세포록색형광단백(GFP)적표체수평측정병독적도.장HSC-T6세포분위공백조、공병독대조조급BMP-7만병독감염조,분별용Real-Time PCR화Western blotting방법검측BMP-7 mRNA화단백적표체.결과 PCR확증검측양성균락화측서증실,성공구건대서BMP-7기인중조만병독재체.도치형광현미경하관찰가견,H1299세포정록색형광,병측득병독적도위1×104 ifμ/μL.중조만병독감염HSC-T6후,Real-time PCR화Western blotting방법분별검측도BMP-7 mRNA화단백균은정고표체.BMP-7만병독감염조여공병독대조조비교,차이유통계학의의(P<0.01);공병독대조조여공백조비교,차이무통계학의의(P<0.05).결론 성공구건료대유대서BMP-7기인적만병독재체,병실현기재HSC-T6적은정고표체.
