浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2011年
3期
489-494
,共6页
李江涛%殷相平%张金卫%丁农%柳纪省
李江濤%慇相平%張金衛%丁農%柳紀省
리강도%은상평%장금위%정농%류기성
狂犬病病毒G基因%N基因%内部核糖体进入位点序列%重组腺病毒
狂犬病病毒G基因%N基因%內部覈糖體進入位點序列%重組腺病毒
광견병병독G기인%N기인%내부핵당체진입위점서렬%중조선병독
通过引入内部核糖体进入位点序列,构建狂犬病毒G基因和N基因共表达的腺病毒载体.通过RTPCR方法扩增得到RVG基因、N基因.N基因先亚克隆入pIRES质粒;G基因经Kpn Ⅰ和Mlu Ⅰ,pIRES-N质粒经Mlu Ⅰ、Not Ⅰ双酶切,回收目的基因后与经Kpn Ⅰ和Not Ⅰ双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒.线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒,RT-PCR法检测狂犬病毒精蛋白和核蛋白基因片段.该重组病毒质粒经酶切鉴定与预期结果一致;转染293细胞后观察到绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法可检测到糖蛋白和核蛋白基因片段.试验成功构建了G和N双基因共表达重组腺病毒载体,为狂犬病活载体疫苗的研制提供了依据.
通過引入內部覈糖體進入位點序列,構建狂犬病毒G基因和N基因共錶達的腺病毒載體.通過RTPCR方法擴增得到RVG基因、N基因.N基因先亞剋隆入pIRES質粒;G基因經Kpn Ⅰ和Mlu Ⅰ,pIRES-N質粒經Mlu Ⅰ、Not Ⅰ雙酶切,迴收目的基因後與經Kpn Ⅰ和Not Ⅰ雙酶切處理的腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV連接,再與pAdEasy-1質粒在BJ5183菌中同源重組產生腺病毒載體質粒.線性化後的重組腺病毒質粒轉染293細胞,通過觀察報告基因綠色熒光蛋白的錶達鑒定重組的腺病毒,RT-PCR法檢測狂犬病毒精蛋白和覈蛋白基因片段.該重組病毒質粒經酶切鑒定與預期結果一緻;轉染293細胞後觀察到綠色熒光蛋白的錶達;RT-PCR法可檢測到糖蛋白和覈蛋白基因片段.試驗成功構建瞭G和N雙基因共錶達重組腺病毒載體,為狂犬病活載體疫苗的研製提供瞭依據.
통과인입내부핵당체진입위점서렬,구건광견병독G기인화N기인공표체적선병독재체.통과RTPCR방법확증득도RVG기인、N기인.N기인선아극륭입pIRES질립;G기인경Kpn Ⅰ화Mlu Ⅰ,pIRES-N질립경Mlu Ⅰ、Not Ⅰ쌍매절,회수목적기인후여경Kpn Ⅰ화Not Ⅰ쌍매절처리적선병독천사재체pAdTrack-CMV련접,재여pAdEasy-1질립재BJ5183균중동원중조산생선병독재체질립.선성화후적중조선병독질립전염293세포,통과관찰보고기인록색형광단백적표체감정중조적선병독,RT-PCR법검측광견병독정단백화핵단백기인편단.해중조병독질립경매절감정여예기결과일치;전염293세포후관찰도록색형광단백적표체;RT-PCR법가검측도당단백화핵단백기인편단.시험성공구건료G화N쌍기인공표체중조선병독재체,위광견병활재체역묘적연제제공료의거.
