CAJ | 학술논문

植酸酶作为饲料添加剂能够有效提高动物对饲料中磷的利用率及减少粪便中磷排放对环境的污染,并降低植酸的抗营养作用.为了获得性能稳定的高活性植酸酶,采用PCR扩增芽孢杆菌(Bacillus sp.)中性植酸酶基因phyC(GenBank登录号:FJ986327)的成熟肽编码序列,将其克隆进原核表达载体pET-28a(+),并转化E.coli BL21 (DE3)进行表达.在37℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导4h能够获得大量包涵体蛋白,在25℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导6h有利于可溶性蛋白的获得.利用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组植酸酶产物,获得的中性植酸酶的部分酶学特性为:耐热性较好,最适反应温度55℃,在70℃处理10 min可保持20％以上的酶活性；耐酸、碱能力较强,最适pH 6.0～7.0,pH5.5 ～9.0时能保持80％以上的酶活性,pH 5.0～ 10.0时处理60 min仍能保持70％以上的酶活性,在pH 2.0 ～4.0时能保持40％以上的酶活性.利用构建的切除芽孢杆菌中性植酸酶基因phyC信号肽编码序列的原核表达载体及优化的诱导表达条件,能够在大肠杆菌中高量表达性能稳定的芽孢杆菌中性植酸酶.
식산매작위사료첨가제능구유효제고동물대사료중린적이용솔급감소분편중린배방대배경적오염,병강저식산적항영양작용.위료획득성능은정적고활성식산매,채용PCR확증아포간균(Bacillus sp.)중성식산매기인phyC(GenBank등록호:FJ986327)적성숙태편마서렬,장기극륭진원핵표체재체pET-28a(+),병전화E.coli BL21 (DE3)진행표체.재37℃조건하이0.5 mmol/L IPTG유도4h능구획득대량포함체단백,재25℃조건하이0.5 mmol/L IPTG유도6h유리우가용성단백적획득.이용Ni-NTA친화층석주순화중조식산매산물,획득적중성식산매적부분매학특성위:내열성교호,최괄반응온도55℃,재70℃처리10 min가보지20％이상적매활성；내산、감능력교강,최괄pH 6.0～7.0,pH5.5 ～9.0시능보지80％이상적매활성,pH 5.0～ 10.0시처리60 min잉능보지70％이상적매활성,재pH 2.0 ～4.0시능보지40％이상적매활성.이용구건적절제아포간균중성식산매기인phyC신호태편마서렬적원핵표체재체급우화적유도표체조건,능구재대장간균중고량표체성능은정적아포간균중성식산매.