广州医学院学报
廣州醫學院學報
엄주의학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGZHOU MEDICAL COLLEGE
2012年
2期
6-10
,共5页
吉晓滨%吕景礼%陈敬贤%刘启才%谢景华
吉曉濱%呂景禮%陳敬賢%劉啟纔%謝景華
길효빈%려경례%진경현%류계재%사경화
黑色素瘤抗原编码基因%真核表达%基因克隆%喉肿瘤
黑色素瘤抗原編碼基因%真覈錶達%基因剋隆%喉腫瘤
흑색소류항원편마기인%진핵표체%기인극륭%후종류
目的:克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-A3基因,构建真核表达载体,检测、鉴定其在细胞中的表达.方法:MAGE-A3基因进行PCR扩增,凝胶回收PCR产物片段并连接至pMD18-T载体.测序后将MAGE-A3基因片段亚克隆至真核表达载体,构建成pIRES2-EGFP/MAGE-A3重组质粒.经脂质体转染至293T细胞株后,荧光定量PCR、Western-blotting法鉴定MAGE-A3基因的表达.结果:MAGE-A3基因正确克隆在plRES2-EGFP/MAGE-A3,测序结果与GenBank公布的MAGE-A3序列一致.转染293T细胞后能检测到MAGE-A3基因和蛋白的表达.结论:成功构建plRES2-EGFP/MAGE-A3真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3蛋白,奠定了其作为DNA疫苗应用的基础.
目的:剋隆人黑色素瘤相關抗原MAGE-A3基因,構建真覈錶達載體,檢測、鑒定其在細胞中的錶達.方法:MAGE-A3基因進行PCR擴增,凝膠迴收PCR產物片段併連接至pMD18-T載體.測序後將MAGE-A3基因片段亞剋隆至真覈錶達載體,構建成pIRES2-EGFP/MAGE-A3重組質粒.經脂質體轉染至293T細胞株後,熒光定量PCR、Western-blotting法鑒定MAGE-A3基因的錶達.結果:MAGE-A3基因正確剋隆在plRES2-EGFP/MAGE-A3,測序結果與GenBank公佈的MAGE-A3序列一緻.轉染293T細胞後能檢測到MAGE-A3基因和蛋白的錶達.結論:成功構建plRES2-EGFP/MAGE-A3真覈錶達質粒,併能在293T細胞中有效錶達MAGE-A3蛋白,奠定瞭其作為DNA疫苗應用的基礎.
목적:극륭인흑색소류상관항원MAGE-A3기인,구건진핵표체재체,검측、감정기재세포중적표체.방법:MAGE-A3기인진행PCR확증,응효회수PCR산물편단병련접지pMD18-T재체.측서후장MAGE-A3기인편단아극륭지진핵표체재체,구건성pIRES2-EGFP/MAGE-A3중조질립.경지질체전염지293T세포주후,형광정량PCR、Western-blotting법감정MAGE-A3기인적표체.결과:MAGE-A3기인정학극륭재plRES2-EGFP/MAGE-A3,측서결과여GenBank공포적MAGE-A3서렬일치.전염293T세포후능검측도MAGE-A3기인화단백적표체.결론:성공구건plRES2-EGFP/MAGE-A3진핵표체질립,병능재293T세포중유효표체MAGE-A3단백,전정료기작위DNA역묘응용적기출.
