CAJ | 학술논문

目的构建可表达A组轮状病毒组特异性抗原VP6的非复制型重组腺病毒载体,并对其生物学和免疫学性质进行研究.方法将人轮状病毒VP6基因插入腺病毒载体pShuttle-CMV中,通过细菌内同源重组方法获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒.用聚合酶链反应(PCR)及Southern blot方法,检测目的基因在重组腺病毒中的整合,用Western blot检测VP6的表达.通过灌胃和滴鼻两种途径对小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和粘膜免疫进行分析.结果得到了重组腺病毒rvAd-VP6,VP6基因整合于腺病毒基因组中,在293细胞中可稳定表达.2次免疫后灌胃和滴鼻两组小鼠均产生明显免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶1 000和1∶10 000～1∶100 000.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA,滴度为1∶10～1∶100.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到分泌型IgA(sIgA),灌胃组仅在肠道检测到sIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.结论人轮状病毒VP6基因重组腺病毒载体的成功构建及所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础.
목적구건가표체A조륜상병독조특이성항원VP6적비복제형중조선병독재체,병대기생물학화면역학성질진행연구.방법장인륜상병독VP6기인삽입선병독재체pShuttle-CMV중,통과세균내동원중조방법획득중조선병독DNA,장기전염293세포획득중조선병독.용취합매련반응(PCR)급Southern blot방법,검측목적기인재중조선병독중적정합,용Western blot검측VP6적표체.통과관위화적비량충도경대소서진행면역,병대면역후소서체액화점막면역진행분석.결과득도료중조선병독rvAd-VP6,VP6기인정합우선병독기인조중,재293세포중가은정표체.2차면역후관위화적비량조소서균산생명현면역응답,혈청IgG항체적도분별위1∶1 000화1∶10 000～1∶100 000.제료혈청IgG외,소서환산생료교강적침대륜상병독적혈청IgA,적도위1∶10～1∶100.적비조재폐관세액화장균장액중균가검측도분비형IgA(sIgA),관위조부재장도검측도sIgA.적비조적면역학효과명현우우관위조.결론인륜상병독VP6기인중조선병독재체적성공구건급소취득적량호면역학효과,위아국구유자주지식산권적신형륜상병독기인공정역묘적연제전정료기출.