CAJ | 학술논문

为了提高λ噬菌体体外重包装致突变检测系统的特异性和利用该系统用于致突变分子机制的研究，我们引入了LacZ基因作为靶基因和报告基因。乙基亚硝基脲（1-ethyl-1-nitrosourea，ENU）和9-氨基吖啶（9-aminoacriaine，9-AA）直接处理含LacZ基因的λgtll DNA，在体外重新包装为噬菌体，然后转染宿主菌Y1090并在含X-Gal和IPTG的选择培养基上培养。通过计数清亮斑突变体和兰斑野生型的数目计算噬菌体的存活率和突变率；扩增和测定突变噬菌体中LacZ基因的序列，分析了两种化合物的分子致突变机制。结果表明：在ENU和9-AA作用下，噬菌体存活率明显下降，而突变率则相应上升，并呈较好剂量-反应关系；9-AA主要诱发移码突变（71.8％），A，G，C，T 4种碱基发生移码突变率分别为27.3%，24.2%，24.2％和24.2%；9-AA诱发的单个碱基缺失主要发生在相同的碱基的重复区内（68.6％），在单个或2个重复碱基位点发生缺失频率较底。9-AA诱发碱基置换主要是碱基巅换（92％），G：C碱基对比A：T碱基对易于诱发碱基置换（76.7% vs 24.3%)；9-AA诱发碱基置换后一般易于同邻近碱基形成相同碱基的重复。ENU诱发的突变主要发生在G：C碱基对上；ENU诱发碱基置换主要是G：C→A：T、G: C→C: G和A: T→T: A巅换。该实验表明含有LacZ靶基因的λgtll DNA致突变检测系统比λDNA致突变检测系统更完善。该系统以噬菌斑的存活率、突变率和分子突变谱作为检测终点，不仅提高了检测系统的特异性和敏感度，而且能进一步研究化合物的致突变分子机制和进行危险度的评价。
위료제고λ서균체체외중포장치돌변검측계통적특이성화이용해계통용우치돌변분자궤제적연구，아문인입료LacZ기인작위파기인화보고기인。을기아초기뇨（1-ethyl-1-nitrosourea，ENU）화9-안기아정（9-aminoacriaine，9-AA）직접처리함LacZ기인적λgtll DNA，재체외중신포장위서균체，연후전염숙주균Y1090병재함X-Gal화IPTG적선택배양기상배양。통과계수청량반돌변체화란반야생형적수목계산서균체적존활솔화돌변솔；확증화측정돌변서균체중LacZ기인적서렬，분석료량충화합물적분자치돌변궤제。결과표명：재ENU화9-AA작용하，서균체존활솔명현하강，이돌변솔칙상응상승，병정교호제량-반응관계；9-AA주요유발이마돌변（71.8％），A，G，C，T 4충감기발생이마돌변솔분별위27.3%，24.2%，24.2％화24.2%；9-AA유발적단개감기결실주요발생재상동적감기적중복구내（68.6％），재단개혹2개중복감기위점발생결실빈솔교저。9-AA유발감기치환주요시감기전환（92％），G：C감기대비A：T감기대역우유발감기치환（76.7% vs 24.3%)；9-AA유발감기치환후일반역우동린근감기형성상동감기적중복。ENU유발적돌변주요발생재G：C감기대상；ENU유발감기치환주요시G：C→A：T、G: C→C: G화A: T→T: A전환。해실험표명함유LacZ파기인적λgtll DNA치돌변검측계통비λDNA치돌변검측계통경완선。해계통이서균반적존활솔、돌변솔화분자돌변보작위검측종점，불부제고료검측계통적특이성화민감도，이차능진일보연구화합물적치돌변분자궤제화진행위험도적평개。