中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2003年
5期
397-400
,共4页
介建政%王健伟%王巍%姜秀丽%魏强%洪涛
介建政%王健偉%王巍%薑秀麗%魏彊%洪濤
개건정%왕건위%왕외%강수려%위강%홍도
腺病毒载体%肝细胞生长因子%NK4
腺病毒載體%肝細胞生長因子%NK4
선병독재체%간세포생장인자%NK4
目的构建含有肝细胞生长因子(HGF)NK4基因的重组腺病毒载体,为应用HGF/NK4进行肿瘤基因治疗奠定实验基础.方法应用AdEasy腺病毒载体系统,将PCR扩增所得的NK4基因片段与穿梭质粒pShuttle-CMV进行连接,获得重组质粒pShuttle-CMV-NK4,将该质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183获得重组腺病毒质粒pAdCMV-NK4,用该质粒转染293细胞包装产生出重组腺病毒rvAdCMV-NK4.重组腺病毒分别经电子显微镜技术及RT-PCR、Western Blot等方法进行鉴定.结果得到含有NK4基因的重组腺病毒rvAdCMV-NK4,电子显微镜下可见典型腺病毒颗粒形态,RT-PCR及Western Blot分析显示rvAdCMV-NK4感染293细胞后NK4基因可有效转录并表达.结论成功构建出含有NK4基因的重组腺病毒rvAdCMV-NK4,为下一步开展关于NK4基因的肿瘤治疗提供了基础.
目的構建含有肝細胞生長因子(HGF)NK4基因的重組腺病毒載體,為應用HGF/NK4進行腫瘤基因治療奠定實驗基礎.方法應用AdEasy腺病毒載體繫統,將PCR擴增所得的NK4基因片段與穿梭質粒pShuttle-CMV進行連接,穫得重組質粒pShuttle-CMV-NK4,將該質粒與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1共轉化大腸桿菌BJ5183穫得重組腺病毒質粒pAdCMV-NK4,用該質粒轉染293細胞包裝產生齣重組腺病毒rvAdCMV-NK4.重組腺病毒分彆經電子顯微鏡技術及RT-PCR、Western Blot等方法進行鑒定.結果得到含有NK4基因的重組腺病毒rvAdCMV-NK4,電子顯微鏡下可見典型腺病毒顆粒形態,RT-PCR及Western Blot分析顯示rvAdCMV-NK4感染293細胞後NK4基因可有效轉錄併錶達.結論成功構建齣含有NK4基因的重組腺病毒rvAdCMV-NK4,為下一步開展關于NK4基因的腫瘤治療提供瞭基礎.
목적구건함유간세포생장인자(HGF)NK4기인적중조선병독재체,위응용HGF/NK4진행종류기인치료전정실험기출.방법응용AdEasy선병독재체계통,장PCR확증소득적NK4기인편단여천사질립pShuttle-CMV진행련접,획득중조질립pShuttle-CMV-NK4,장해질립여선병독골가질립pAdEasy-1공전화대장간균BJ5183획득중조선병독질립pAdCMV-NK4,용해질립전염293세포포장산생출중조선병독rvAdCMV-NK4.중조선병독분별경전자현미경기술급RT-PCR、Western Blot등방법진행감정.결과득도함유NK4기인적중조선병독rvAdCMV-NK4,전자현미경하가견전형선병독과립형태,RT-PCR급Western Blot분석현시rvAdCMV-NK4감염293세포후NK4기인가유효전록병표체.결론성공구건출함유NK4기인적중조선병독rvAdCMV-NK4,위하일보개전관우NK4기인적종류치료제공료기출.
