山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2005年
4期
321-328
,共8页
姜润德%张立新%岳文%李春海%王占民
薑潤德%張立新%嶽文%李春海%王佔民
강윤덕%장립신%악문%리춘해%왕점민
消减杂交%基因%多药耐药%鼻咽肿瘤
消減雜交%基因%多藥耐藥%鼻嚥腫瘤
소감잡교%기인%다약내약%비인종류
目的:探索一种可以直接克隆差异表达基因全长cDNA的方法.方法:结合Clontech公司的"SMART PCR"cDNA合成技术和Promega公司的生物素-磁珠亲和技术,以鼻咽癌耐药细胞系CNE2/DDP及其亲代细胞CNE2为研究对象,采用一种基于PCR技术的改良消减杂交方法筛选并克隆耐药相关基因.点杂交鉴定排除假阳性,对部分差异表达片段测序并进行序列分析,RT-PCR对差异表达的基因片段做进一步验证.结果:用此方法建立了可以克隆差异表达基因cDNA全长的双向消减文库.经过对部分差异表达片段测序和序列分析,获得了6个耐药细胞差异表达的基因片断,其中5个有完整的开放读框,可能代表耐药相关的差异表达基因.对此5个序列登录GenBank并获得登录号为AY196929-196933.结论:改良的消减杂交方法是克隆差异表达基因的有效方法.应用此方法研究发现,有多个功能已知和未知的基因通过上调或降低其表达参与了鼻咽癌耐药性的产生.
目的:探索一種可以直接剋隆差異錶達基因全長cDNA的方法.方法:結閤Clontech公司的"SMART PCR"cDNA閤成技術和Promega公司的生物素-磁珠親和技術,以鼻嚥癌耐藥細胞繫CNE2/DDP及其親代細胞CNE2為研究對象,採用一種基于PCR技術的改良消減雜交方法篩選併剋隆耐藥相關基因.點雜交鑒定排除假暘性,對部分差異錶達片段測序併進行序列分析,RT-PCR對差異錶達的基因片段做進一步驗證.結果:用此方法建立瞭可以剋隆差異錶達基因cDNA全長的雙嚮消減文庫.經過對部分差異錶達片段測序和序列分析,穫得瞭6箇耐藥細胞差異錶達的基因片斷,其中5箇有完整的開放讀框,可能代錶耐藥相關的差異錶達基因.對此5箇序列登錄GenBank併穫得登錄號為AY196929-196933.結論:改良的消減雜交方法是剋隆差異錶達基因的有效方法.應用此方法研究髮現,有多箇功能已知和未知的基因通過上調或降低其錶達參與瞭鼻嚥癌耐藥性的產生.
목적:탐색일충가이직접극륭차이표체기인전장cDNA적방법.방법:결합Clontech공사적"SMART PCR"cDNA합성기술화Promega공사적생물소-자주친화기술,이비인암내약세포계CNE2/DDP급기친대세포CNE2위연구대상,채용일충기우PCR기술적개량소감잡교방법사선병극륭내약상관기인.점잡교감정배제가양성,대부분차이표체편단측서병진행서렬분석,RT-PCR대차이표체적기인편단주진일보험증.결과:용차방법건립료가이극륭차이표체기인cDNA전장적쌍향소감문고.경과대부분차이표체편단측서화서렬분석,획득료6개내약세포차이표체적기인편단,기중5개유완정적개방독광,가능대표내약상관적차이표체기인.대차5개서렬등록GenBank병획득등록호위AY196929-196933.결론:개량적소감잡교방법시극륭차이표체기인적유효방법.응용차방법연구발현,유다개공능이지화미지적기인통과상조혹강저기표체삼여료비인암내약성적산생.
