CD80鼠-人嵌合抗体的CHO细胞表达及体外生物学功能的初步研究
CD80서-인감합항체적CHO세포표체급체외생물학공능적초보연구
Expression of human-mouse chimeric antibody against CD80 in CHO cells and preliminary study on the biological activity in vitro
  • 万方数据
    中国免疫学杂志 중국면역학잡지
    CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
    2009年 2期 114-117 ,共4页

    徐耀瑜%胡玲玲%陈永井%程钢%罗先富%孙杰%刘玉华%王艳茹%陈明心%邱玉华

    서요유%호령령%진영정%정강%라선부%손걸%류옥화%왕염여%진명심%구옥화

    CD80%嵌合抗体%瞬时表达%稳定表达%阻断作用 CD80%嵌閤抗體%瞬時錶達%穩定錶達%阻斷作用
    CD80%감합항체%순시표체%은정표체%조단작용
    目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能.方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;Protein G亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用.结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56 mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖.结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性.
    목적:CHO세포표체항인CD80서-인감합항체ch4E5,병연구기재체외조단CD80개도적공자격신호전도적생물학공능.방법:구건함유감합중、경련기인적표체재체pIRES/ch4E5;표체재체선전염293T세포,FCM검측도ch4E5항체적순시표체후,표체재체재전염CHO세포,구건은정표체세포주CHO-ch4E5;Protein G친화층석법종CHO-ch4E5세포무혈청배양상청중순화ch4E5항체,FCM검측ch4E5항체대막형CD80적식별;이사렬매소처리적정상인외주혈단핵세포PBMCs위자격세포,이이체정상인외주혈림파세포PBLs위반응세포,용MTT법분석ch4E5항체적조단작용.결과:ch4E5항체재293T세포적순시표체우48소시체도고봉,상청여L929-B7-1세포결합솔위96.0%;CHO-ch4E5세포지속표체ch4E5항체,기배양상청여L929-B7-1세포결합솔위95.7%;3천배양상청중,ch4E5항체적산솔약위5.56 mg/L;ch4E5항체화L929-B7-1、Daudi、Sub-T세포결합솔분별위94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5항체가이조단CD80개도적공자격신호전도,억제이체PBLs적체외증식.결론:재CHO세포중성공표체료항인CD80서-인감합항체ch4E5,재체외해감합항체구유친본항체조단CD80개도적공자격신호적생물학활성.
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