CAJ | 학술논문

背景:树突状细胞是体内最重要的抗原提呈细胞,在免疫调节中扮演着免疫应答和免疫耐受的双重角色,对维持机体的免疫平衡起重要作用.目的:探讨耐受性树突状细胞的体外培养方法,观察不同培养条件下耐受性树突状细胞的基本特征.设计、时间及地点:以细胞为观察对象,随机分组设计,于2006-09/2008-02在南昌大学第一附属医院中心实验室完成.材料:8周龄的Balb/c纯系雄性小鼠,体质量20～25 g,用于分离和制备骨髓单个核细胞.方法:将小鼠骨髓单个核细胞分为5组在不同的培养体系中进行体外诱导培养:空白对照组(不加任何因子)、树突状细胞组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4)、血管活性肠肽组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽)、地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+地塞米松)、血管活性肠肽+地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽+地塞米松).主要观察指标:光镜下动态观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞CDS0、CD86、CD40、CD11c表达,四甲基偶氮唑盐法检测树突状细胞刺激淋巴细胞增殖的活性,特异性夹心酶联免疫分析测定树突状细胞上清液中白细胞介素10、白细胞介素12的水平.结果:①利用粒-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素4、血管活性肠肽、地塞米松、脂多糖等因子体外培养能生成具有典型树枝状突起的树突状细胞.②树突状细胞组、血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD11c的表达高于空白对照组(P＜0.05).血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD40、CD80和CD86表达,淋巴细胞增殖活性及培养上清液白细胞介素12水平均低于树突状细胞组(P＜0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40μg/L、地塞米松组以10 μg/L减低明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40 μg/L、地塞米松为10 μg/L条件下为最低,差异具有显著性意义(P＜0.05).③血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组细胞培养上清液中白细胞介素10水平均高于树突状细胞组(P＜0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40 μg/L,地塞米松组以10 μg/L升高明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40 μg/L,地塞米松为10 μg/L条件下为最高,差异具有显著性意义(P＜0.05).结论:①小鼠骨髓单个核细胞体外经粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽或/和地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成致耐受性树突状细胞.②与常规诱导培养树突状细胞方法比较,耐受性树突状细胞具有CD40、CD80、CD86表达低,刺激淋巴细胞增殖弱的特点;耐受性树突状细胞培养体系上清液白细胞介素10水平高而白细胞介素12水平低.③粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽+地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成耐受性树突状细胞效果较佳,其中以血管活性肠肽40μg/L、地塞米松10 pg/L的培养条件为最好. 揹景:樹突狀細胞是體內最重要的抗原提呈細胞,在免疫調節中扮縯著免疫應答和免疫耐受的雙重角色,對維持機體的免疫平衡起重要作用.目的:探討耐受性樹突狀細胞的體外培養方法,觀察不同培養條件下耐受性樹突狀細胞的基本特徵.設計、時間及地點:以細胞為觀察對象,隨機分組設計,于2006-09/2008-02在南昌大學第一附屬醫院中心實驗室完成.材料:8週齡的Balb/c純繫雄性小鼠,體質量20～25 g,用于分離和製備骨髓單箇覈細胞.方法:將小鼠骨髓單箇覈細胞分為5組在不同的培養體繫中進行體外誘導培養:空白對照組(不加任何因子)、樹突狀細胞組(粒-巨噬細胞集落刺激因子+白細胞介素4)、血管活性腸肽組(粒-巨噬細胞集落刺激因子+血管活性腸肽)、地塞米鬆組(粒-巨噬細胞集落刺激因子+地塞米鬆)、血管活性腸肽+地塞米鬆組(粒-巨噬細胞集落刺激因子+血管活性腸肽+地塞米鬆).主要觀察指標:光鏡下動態觀察細胞形態,流式細胞儀檢測細胞CDS0、CD86、CD40、CD11c錶達,四甲基偶氮唑鹽法檢測樹突狀細胞刺激淋巴細胞增殖的活性,特異性夾心酶聯免疫分析測定樹突狀細胞上清液中白細胞介素10、白細胞介素12的水平.結果:①利用粒-巨噬細胞集落刺激因子、白細胞介素4、血管活性腸肽、地塞米鬆、脂多糖等因子體外培養能生成具有典型樹枝狀突起的樹突狀細胞.②樹突狀細胞組、血管活性腸肽組、地塞米鬆組、血管活性腸肽+地塞米鬆組CD11c的錶達高于空白對照組(P＜0.05).血管活性腸肽組、地塞米鬆組、血管活性腸肽+地塞米鬆組CD40、CD80和CD86錶達,淋巴細胞增殖活性及培養上清液白細胞介素12水平均低于樹突狀細胞組(P＜0.05),血管活性腸肽組以質量濃度為40μg/L、地塞米鬆組以10 μg/L減低明顯,其中血管活性腸肽+地塞米鬆組在血管活性腸肽質量濃度為40 μg/L、地塞米鬆為10 μg/L條件下為最低,差異具有顯著性意義(P＜0.05).③血管活性腸肽組、地塞米鬆組、血管活性腸肽+地塞米鬆組細胞培養上清液中白細胞介素10水平均高于樹突狀細胞組(P＜0.05),血管活性腸肽組以質量濃度為40 μg/L,地塞米鬆組以10 μg/L升高明顯,其中血管活性腸肽+地塞米鬆組在血管活性腸肽質量濃度為40 μg/L,地塞米鬆為10 μg/L條件下為最高,差異具有顯著性意義(P＜0.05).結論:①小鼠骨髓單箇覈細胞體外經粒-巨噬細胞集落刺激因子、血管活性腸肽或/和地塞米鬆、脂多糖聯閤誘導培養生成緻耐受性樹突狀細胞.②與常規誘導培養樹突狀細胞方法比較,耐受性樹突狀細胞具有CD40、CD80、CD86錶達低,刺激淋巴細胞增殖弱的特點;耐受性樹突狀細胞培養體繫上清液白細胞介素10水平高而白細胞介素12水平低.③粒-巨噬細胞集落刺激因子、血管活性腸肽+地塞米鬆、脂多糖聯閤誘導培養生成耐受性樹突狀細胞效果較佳,其中以血管活性腸肽40μg/L、地塞米鬆10 pg/L的培養條件為最好.
배경:수돌상세포시체내최중요적항원제정세포,재면역조절중분연착면역응답화면역내수적쌍중각색,대유지궤체적면역평형기중요작용.목적:탐토내수성수돌상세포적체외배양방법,관찰불동배양조건하내수성수돌상세포적기본특정.설계、시간급지점:이세포위관찰대상,수궤분조설계,우2006-09/2008-02재남창대학제일부속의원중심실험실완성.재료:8주령적Balb/c순계웅성소서,체질량20～25 g,용우분리화제비골수단개핵세포.방법:장소서골수단개핵세포분위5조재불동적배양체계중진행체외유도배양:공백대조조(불가임하인자)、수돌상세포조(립-거서세포집락자격인자+백세포개소4)、혈관활성장태조(립-거서세포집락자격인자+혈관활성장태)、지새미송조(립-거서세포집락자격인자+지새미송)、혈관활성장태+지새미송조(립-거서세포집락자격인자+혈관활성장태+지새미송).주요관찰지표:광경하동태관찰세포형태,류식세포의검측세포CDS0、CD86、CD40、CD11c표체,사갑기우담서염법검측수돌상세포자격림파세포증식적활성,특이성협심매련면역분석측정수돌상세포상청액중백세포개소10、백세포개소12적수평.결과:①이용립-거서세포집락자격인자、백세포개소4、혈관활성장태、지새미송、지다당등인자체외배양능생성구유전형수지상돌기적수돌상세포.②수돌상세포조、혈관활성장태조、지새미송조、혈관활성장태+지새미송조CD11c적표체고우공백대조조(P＜0.05).혈관활성장태조、지새미송조、혈관활성장태+지새미송조CD40、CD80화CD86표체,림파세포증식활성급배양상청액백세포개소12수평균저우수돌상세포조(P＜0.05),혈관활성장태조이질량농도위40μg/L、지새미송조이10 μg/L감저명현,기중혈관활성장태+지새미송조재혈관활성장태질량농도위40 μg/L、지새미송위10 μg/L조건하위최저,차이구유현저성의의(P＜0.05).③혈관활성장태조、지새미송조、혈관활성장태+지새미송조세포배양상청액중백세포개소10수평균고우수돌상세포조(P＜0.05),혈관활성장태조이질량농도위40 μg/L,지새미송조이10 μg/L승고명현,기중혈관활성장태+지새미송조재혈관활성장태질량농도위40 μg/L,지새미송위10 μg/L조건하위최고,차이구유현저성의의(P＜0.05).결론:①소서골수단개핵세포체외경립-거서세포집락자격인자、혈관활성장태혹/화지새미송、지다당연합유도배양생성치내수성수돌상세포.②여상규유도배양수돌상세포방법비교,내수성수돌상세포구유CD40、CD80、CD86표체저,자격림파세포증식약적특점;내수성수돌상세포배양체계상청액백세포개소10수평고이백세포개소12수평저.③립-거서세포집락자격인자、혈관활성장태+지새미송、지다당연합유도배양생성내수성수돌상세포효과교가,기중이혈관활성장태40μg/L、지새미송10 pg/L적배양조건위최호.