大豆科学
大豆科學
대두과학
SOYBEAN SCIENCE
2010年
6期
1024-1027
,共4页
曹成%魏梅生%吴兴泉%张永江%李桂芬
曹成%魏梅生%吳興泉%張永江%李桂芬
조성%위매생%오흥천%장영강%리계분
胶体金%试纸条%菜豆荚斑驳病毒%RT-PCR%核酸检测
膠體金%試紙條%菜豆莢斑駁病毒%RT-PCR%覈痠檢測
효체금%시지조%채두협반박병독%RT-PCR%핵산검측
菜豆荚斑驳病毒是我国进境植物检疫性有害生物,为了能在现场快速检测出该病毒,将PCR核酸扩增的高灵敏度和胶体金层析方法快速简便、直观的优点结合起来,建立了PCR扩增产物的胶体金层析检测方法.该方法是用生物素标记上一个引物,用荧光素(或地高辛)标记上另一个引物,通过PCR扩增产生双标记的扩增产物.将兔抗生物素多克隆抗体与20～30 nm大小的胶体金颗粒结合上并固定在释放垫上,同时在硝酸纤维素层析膜上点上抗荧光素(或地高辛)的单克隆抗体作为T检测点,点上羊抗兔多克隆抗体作为C质控点.这种RT-PCR扩增产物可在T点上被检测到,同时C点也要显色.用所建立方法在15 min内可检测出菜豆荚斑驳病毒的RT-PCR扩增产物,免去了溴化乙锭染色和电泳的过程.
菜豆莢斑駁病毒是我國進境植物檢疫性有害生物,為瞭能在現場快速檢測齣該病毒,將PCR覈痠擴增的高靈敏度和膠體金層析方法快速簡便、直觀的優點結閤起來,建立瞭PCR擴增產物的膠體金層析檢測方法.該方法是用生物素標記上一箇引物,用熒光素(或地高辛)標記上另一箇引物,通過PCR擴增產生雙標記的擴增產物.將兔抗生物素多剋隆抗體與20～30 nm大小的膠體金顆粒結閤上併固定在釋放墊上,同時在硝痠纖維素層析膜上點上抗熒光素(或地高辛)的單剋隆抗體作為T檢測點,點上羊抗兔多剋隆抗體作為C質控點.這種RT-PCR擴增產物可在T點上被檢測到,同時C點也要顯色.用所建立方法在15 min內可檢測齣菜豆莢斑駁病毒的RT-PCR擴增產物,免去瞭溴化乙錠染色和電泳的過程.
채두협반박병독시아국진경식물검역성유해생물,위료능재현장쾌속검측출해병독,장PCR핵산확증적고령민도화효체금층석방법쾌속간편、직관적우점결합기래,건립료PCR확증산물적효체금층석검측방법.해방법시용생물소표기상일개인물,용형광소(혹지고신)표기상령일개인물,통과PCR확증산생쌍표기적확증산물.장토항생물소다극륭항체여20～30 nm대소적효체금과립결합상병고정재석방점상,동시재초산섬유소층석막상점상항형광소(혹지고신)적단극륭항체작위T검측점,점상양항토다극륭항체작위C질공점.저충RT-PCR확증산물가재T점상피검측도,동시C점야요현색.용소건립방법재15 min내가검측출채두협반박병독적RT-PCR확증산물,면거료추화을정염색화전영적과정.
