山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2010年
12期
1019-1021
,共3页
亚克隆%载体构建%载体改造
亞剋隆%載體構建%載體改造
아극륭%재체구건%재체개조
目的 构建带绿色荧光蛋白(GFP)的pcDNA6/myc-hisB的真核表达载体. 方法 采用亚克隆的技术扩增得到GFP的开放阅读框序列,Hind Ⅲ和Kpn Ⅰ双酶切后插入pcDNA6/myc-hisB,重组体经质粒PCR和酶切鉴定,并转染HEK 293T细胞后观察绿色荧光的表达,同时经Western blot检测GFP和标签蛋白myc的表达. 结果 PCR扩增得到特异的GFP开放阅读框序列,质粒PCR和酶切鉴定显示pcDNA6/myc-hisB-GFP构建成功,细胞转染结果 表明重组体可以表达GFP和myc蛋白.结论 获得带有绿色荧光蛋白的pcDNA6/myc-hisB-GFP的真核表达载体,为此载体的应用拓展了更大的空间.
目的 構建帶綠色熒光蛋白(GFP)的pcDNA6/myc-hisB的真覈錶達載體. 方法 採用亞剋隆的技術擴增得到GFP的開放閱讀框序列,Hind Ⅲ和Kpn Ⅰ雙酶切後插入pcDNA6/myc-hisB,重組體經質粒PCR和酶切鑒定,併轉染HEK 293T細胞後觀察綠色熒光的錶達,同時經Western blot檢測GFP和標籤蛋白myc的錶達. 結果 PCR擴增得到特異的GFP開放閱讀框序列,質粒PCR和酶切鑒定顯示pcDNA6/myc-hisB-GFP構建成功,細胞轉染結果 錶明重組體可以錶達GFP和myc蛋白.結論 穫得帶有綠色熒光蛋白的pcDNA6/myc-hisB-GFP的真覈錶達載體,為此載體的應用拓展瞭更大的空間.
목적 구건대록색형광단백(GFP)적pcDNA6/myc-hisB적진핵표체재체. 방법 채용아극륭적기술확증득도GFP적개방열독광서렬,Hind Ⅲ화Kpn Ⅰ쌍매절후삽입pcDNA6/myc-hisB,중조체경질립PCR화매절감정,병전염HEK 293T세포후관찰록색형광적표체,동시경Western blot검측GFP화표첨단백myc적표체. 결과 PCR확증득도특이적GFP개방열독광서렬,질립PCR화매절감정현시pcDNA6/myc-hisB-GFP구건성공,세포전염결과 표명중조체가이표체GFP화myc단백.결론 획득대유록색형광단백적pcDNA6/myc-hisB-GFP적진핵표체재체,위차재체적응용탁전료경대적공간.
