中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
8期
726-730
,共5页
林德球%程江丽%邹泽红%何颖%陶爱林
林德毬%程江麗%鄒澤紅%何穎%陶愛林
림덕구%정강려%추택홍%하영%도애림
欧蓍草%花粉过敏原%Par j 1.0102%密码子优化%克隆%表达%纯化
歐蓍草%花粉過敏原%Par j 1.0102%密碼子優化%剋隆%錶達%純化
구시초%화분과민원%Par j 1.0102%밀마자우화%극륭%표체%순화
目的:克隆、表达和纯化欧蓍草花粉主要过敏原Par j 1.方法:根据Par j 1.0102在GenBank中的序列号获得其核苷酸和氨基酸序列,确定开放阅读框,采用DNAstar软件优化密码子,合成全基因,并克隆到表达载体pET-44a中,转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化蛋白表达条件并进行亲和层析纯化和Western blot鉴定.结果:PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pET-44a+/Par j 1.0102原核表达质粒.对表达菌表达条件进行优化,最终确定在30℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导4小时时蛋白表达量最高,重组蛋白经亲和层析纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在23 kD处有明显的条带.Western blot表明重组蛋白具有与StrepII标签抗体结合活性.结论:国内首次获得融合StrepII标签的Par j 1.0102重组蛋白,为欧蓍草花粉过敏诊断及特异性免疫治疗奠定基础.
目的:剋隆、錶達和純化歐蓍草花粉主要過敏原Par j 1.方法:根據Par j 1.0102在GenBank中的序列號穫得其覈苷痠和氨基痠序列,確定開放閱讀框,採用DNAstar軟件優化密碼子,閤成全基因,併剋隆到錶達載體pET-44a中,轉化錶達宿主大腸桿菌Rosetta,優化蛋白錶達條件併進行親和層析純化和Western blot鑒定.結果:PCR擴增及重組質粒測序結果錶明成功地構建瞭pET-44a+/Par j 1.0102原覈錶達質粒.對錶達菌錶達條件進行優化,最終確定在30℃,IPTG濃度為1.0 mmol/L,誘導4小時時蛋白錶達量最高,重組蛋白經親和層析純化,SDS-PAGE分析純化產物在23 kD處有明顯的條帶.Western blot錶明重組蛋白具有與StrepII標籤抗體結閤活性.結論:國內首次穫得融閤StrepII標籤的Par j 1.0102重組蛋白,為歐蓍草花粉過敏診斷及特異性免疫治療奠定基礎.
목적:극륭、표체화순화구시초화분주요과민원Par j 1.방법:근거Par j 1.0102재GenBank중적서렬호획득기핵감산화안기산서렬,학정개방열독광,채용DNAstar연건우화밀마자,합성전기인,병극륭도표체재체pET-44a중,전화표체숙주대장간균Rosetta,우화단백표체조건병진행친화층석순화화Western blot감정.결과:PCR확증급중조질립측서결과표명성공지구건료pET-44a+/Par j 1.0102원핵표체질립.대표체균표체조건진행우화,최종학정재30℃,IPTG농도위1.0 mmol/L,유도4소시시단백표체량최고,중조단백경친화층석순화,SDS-PAGE분석순화산물재23 kD처유명현적조대.Western blot표명중조단백구유여StrepII표첨항체결합활성.결론:국내수차획득융합StrepII표첨적Par j 1.0102중조단백,위구시초화분과민진단급특이성면역치료전정기출.
