浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2011年
2期
258-262
,共5页
赵立娜%崔言顺%任建亭%李建亮%黄兵%李玉峰%马秀丽
趙立娜%崔言順%任建亭%李建亮%黃兵%李玉峰%馬秀麗
조립나%최언순%임건정%리건량%황병%리옥봉%마수려
鸭肝炎病毒%基因C型%VP1基因%克隆表达%多克隆抗体
鴨肝炎病毒%基因C型%VP1基因%剋隆錶達%多剋隆抗體
압간염병독%기인C형%VP1기인%극륭표체%다극륭항체
采用RT-PCR方法,扩增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建新型DHV VP1基因克隆重组质粒.然后将VP1基因定向插入到pET-32a(+)表达载体中,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE电泳分析表明,基因C型DHV-VP1基因可在大肠杆菌中稳定高效的表达.Western-blot检测表明,表达产物可与基因C型DHV阳性血清发生特异性反应.将纯化的重组蛋白免疫4周龄SPF鸡,以纯化的VP1重组蛋白和基因C型DHV全病毒分别包板,制备的抗血清ELISA效价分别可达1∶25 600,1∶51 200,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性.
採用RT-PCR方法,擴增基因C型DHV JFX08株的VP1基因,與pMD18-T載體進行連接,構建新型DHV VP1基因剋隆重組質粒.然後將VP1基因定嚮插入到pET-32a(+)錶達載體中,篩選原覈錶達載體pET-32a-VP1,進行IPTG誘導錶達.SDS-PAGE電泳分析錶明,基因C型DHV-VP1基因可在大腸桿菌中穩定高效的錶達.Western-blot檢測錶明,錶達產物可與基因C型DHV暘性血清髮生特異性反應.將純化的重組蛋白免疫4週齡SPF鷄,以純化的VP1重組蛋白和基因C型DHV全病毒分彆包闆,製備的抗血清ELISA效價分彆可達1∶25 600,1∶51 200,錶明該重組蛋白具有良好的免疫原性.
채용RT-PCR방법,확증기인C형DHV JFX08주적VP1기인,여pMD18-T재체진행련접,구건신형DHV VP1기인극륭중조질립.연후장VP1기인정향삽입도pET-32a(+)표체재체중,사선원핵표체재체pET-32a-VP1,진행IPTG유도표체.SDS-PAGE전영분석표명,기인C형DHV-VP1기인가재대장간균중은정고효적표체.Western-blot검측표명,표체산물가여기인C형DHV양성혈청발생특이성반응.장순화적중조단백면역4주령SPF계,이순화적VP1중조단백화기인C형DHV전병독분별포판,제비적항혈청ELISA효개분별가체1∶25 600,1∶51 200,표명해중조단백구유량호적면역원성.
