质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究
질립표체형siRNA대SARS-CoV복제여감염간우적초보연구
Inhibition of severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus replication and infection by plasmid-mediated siRNA
  • 万方数据
    第三军医大学学报 제삼군의대학학보
    ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
    2005年 2期 91-94 ,共4页

    李阳%倪兵%石辛甫%王希良%何仰东%肖宇%姜曼%黎万玲%吴玉章

    리양%예병%석신보%왕희량%하앙동%초우%강만%려만령%오옥장

    SARS病毒%RNA干扰%小干扰RNA%基因治疗 SARS病毒%RNA榦擾%小榦擾RNA%基因治療
    SARS병독%RNA간우%소간우RNA%기인치료
    目的构建针对SARS-CoV的特异性siRNA质粒,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染.方法根据SARS-CoV的全长基因序列,以4个不同的部位为靶点,分别设计、合成含有19 nt干扰序列的一段寡核苷酸,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3.1-H1载体中,构建表达siRNA的质粒.采用脂质体法将质粒转染Vero E6细胞,经潮霉素抗性筛选后,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验,以观察干扰效应.结果对所构建的质粒分别测序,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致.用不同浓度的SARS-CoV感染转染质粒后的细胞,与阴性对照相比,其细胞病变减轻、活细胞显著增加,病毒空斑明显减少.结论利用RNA干扰能有效的抑制SARS-CoV在细胞中的复制,并对细胞有保护作用,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法.
    목적구건침대SARS-CoV적특이성siRNA질립,이용RNA간우기술억제해병독복제여감염.방법근거SARS-CoV적전장기인서렬,이4개불동적부위위파점,분별설계、합성함유19 nt간우서렬적일단과핵감산,장량량호보적과핵감산경퇴화후소형성적서렬극륭도pSilencer 3.1-H1재체중,구건표체siRNA적질립.채용지질체법장질립전염Vero E6세포,경조매소항성사선후,재대은정표체적세포진행세포병변、병독공반형성화MTT실험,이관찰간우효응.결과대소구건적질립분별측서,학정기함유siRNA적서렬여예기적특이성간우서렬일치.용불동농도적SARS-CoV감염전염질립후적세포,여음성대조상비,기세포병변감경、활세포현저증가,병독공반명현감소.결론이용RNA간우능유효적억제SARS-CoV재세포중적복제,병대세포유보호작용,위예방、치료SARS제공료신적사로화방법.
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