CAJ | 학술논문

[目的]建立根癌农杆菌介导的泡盛曲霉遗传转化系统,探讨利用泡盛曲霉表达异源蛋白的可行性.[方法]从国内主要菌种库中购买泡盛曲霉菌株,根据分泌蛋白图谱分析确定合适的宿主菌,在此基础上通过药物敏感性分析确定遗传转化的选择标记,并利用构建的泡盛曲霉遗传转化体系对米黑根毛霉脂肪酶基因RML进行转化、表达研究,通过转化子鉴定及性质分析考察泡盛曲霉作为异源蛋白表达系统的可行性.[结果]通过分泌蛋白图谱分析确定泡盛曲霉CBS115.52和CICC2257作为异源蛋白表达的宿主菌;药物敏感性试验确定潮霉素抗性基因( HygB1)作为有效的遗传选择标记;在此基础上,利用根癌农杆菌介导的转化方法(agrobacterium tumefaciens mediated transformation,ATMT),将带有HygB1的质粒pHGW - amdS成功导入泡盛曲霉宿主菌CBS115_52,建立以HygB1为选择标记的泡盛曲霉遗传转化体系.利用该体系,介导米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei lipase,RML)的表达载体转化泡盛曲霉,通过底物水解试验、SDS - PAGE及Western blot确定RML基因已在泡盛曲霉中表达.[结论]该研究证明了根癌农杆菌介导转化泡盛曲霉作为异源蛋白的表达体系具有潜在的可行性.
[목적]건립근암농간균개도적포성곡매유전전화계통,탐토이용포성곡매표체이원단백적가행성.[방법]종국내주요균충고중구매포성곡매균주,근거분비단백도보분석학정합괄적숙주균,재차기출상통과약물민감성분석학정유전전화적선택표기,병이용구건적포성곡매유전전화체계대미흑근모매지방매기인RML진행전화、표체연구,통과전화자감정급성질분석고찰포성곡매작위이원단백표체계통적가행성.[결과]통과분비단백도보분석학정포성곡매CBS115.52화CICC2257작위이원단백표체적숙주균;약물민감성시험학정조매소항성기인( HygB1)작위유효적유전선택표기;재차기출상,이용근암농간균개도적전화방법(agrobacterium tumefaciens mediated transformation,ATMT),장대유HygB1적질립pHGW - amdS성공도입포성곡매숙주균CBS115_52,건립이HygB1위선택표기적포성곡매유전전화체계.이용해체계,개도미흑근모매지방매(Rhizomucor miehei lipase,RML)적표체재체전화포성곡매,통과저물수해시험、SDS - PAGE급Western blot학정RML기인이재포성곡매중표체.[결론]해연구증명료근암농간균개도전화포성곡매작위이원단백적표체체계구유잠재적가행성.