中华眼科杂志
中華眼科雜誌
중화안과잡지
Chinese Journal of Ophthalmology
2007年
11期
1022-1027
,共6页
肖青%石浩军%吕明良%曾水清%邝文辉
肖青%石浩軍%呂明良%曾水清%鄺文輝
초청%석호군%려명량%증수청%광문휘
RNA%小分子干扰%核蛋白质类%DNA结合蛋白质类%血管内皮生长因子A%缺氧%色素上皮,眼
RNA%小分子榦擾%覈蛋白質類%DNA結閤蛋白質類%血管內皮生長因子A%缺氧%色素上皮,眼
RNA%소분자간우%핵단백질류%DNA결합단백질류%혈관내피생장인자A%결양%색소상피,안
目的 探讨缺氧条件下人视网膜色素上皮(hRPE)细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 利用体外转录法合成针对HIF-1α mRNA序列的靶点之一的小发卡环RNA(shRNA),以化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境,对缺氧培养条件下hRPE细胞的HIF-1α进行RNA干扰,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α和VEGFmRNA的表达,免疫印迹法检测HIF-1α和VEGF蛋白水平,以正常组、缺氧组及阴性转染组作为对照,观察其对HIF-1α基因的沉默效果及对VEGF表达的抑制作用.结果 转染HIF-1α mRNA的特异性shRNA后,RT-PCR检测结果显示缺氧条件下hRPE细胞HIF-1α基因沉默效果为77.1%,VEGFmRNA的表达水平下降了27.8%;免疫印迹法检测结果显示HIF-1α和VEGF蛋白水平显著降低.结论 针对HIF-1α mRNA的shRNA能有效地使HIF-1α基因沉默,进而抑制缺氧对VEGF的上调作用.
目的 探討缺氧條件下人視網膜色素上皮(hRPE)細胞低氧誘導因子-1α(HIF-1α)對血管內皮生長因子(VEGF)錶達的影響.方法 利用體外轉錄法閤成針對HIF-1α mRNA序列的靶點之一的小髮卡環RNA(shRNA),以化學低氧誘導劑CoCl2模擬RPE細胞缺氧環境,對缺氧培養條件下hRPE細胞的HIF-1α進行RNA榦擾,通過逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測HIF-1α和VEGFmRNA的錶達,免疫印跡法檢測HIF-1α和VEGF蛋白水平,以正常組、缺氧組及陰性轉染組作為對照,觀察其對HIF-1α基因的沉默效果及對VEGF錶達的抑製作用.結果 轉染HIF-1α mRNA的特異性shRNA後,RT-PCR檢測結果顯示缺氧條件下hRPE細胞HIF-1α基因沉默效果為77.1%,VEGFmRNA的錶達水平下降瞭27.8%;免疫印跡法檢測結果顯示HIF-1α和VEGF蛋白水平顯著降低.結論 針對HIF-1α mRNA的shRNA能有效地使HIF-1α基因沉默,進而抑製缺氧對VEGF的上調作用.
목적 탐토결양조건하인시망막색소상피(hRPE)세포저양유도인자-1α(HIF-1α)대혈관내피생장인자(VEGF)표체적영향.방법 이용체외전록법합성침대HIF-1α mRNA서렬적파점지일적소발잡배RNA(shRNA),이화학저양유도제CoCl2모의RPE세포결양배경,대결양배양조건하hRPE세포적HIF-1α진행RNA간우,통과역전록취합매련반응(RT-PCR)검측HIF-1α화VEGFmRNA적표체,면역인적법검측HIF-1α화VEGF단백수평,이정상조、결양조급음성전염조작위대조,관찰기대HIF-1α기인적침묵효과급대VEGF표체적억제작용.결과 전염HIF-1α mRNA적특이성shRNA후,RT-PCR검측결과현시결양조건하hRPE세포HIF-1α기인침묵효과위77.1%,VEGFmRNA적표체수평하강료27.8%;면역인적법검측결과현시HIF-1α화VEGF단백수평현저강저.결론 침대HIF-1α mRNA적shRNA능유효지사HIF-1α기인침묵,진이억제결양대VEGF적상조작용.
