CAJ | 학술논문

Her2/c-erbB-2基因(其产物为膜蛋白p185)是表皮生长因子受体(EGFR)基因家族的一员,在约30%的乳腺癌中发现了其过量表达.为了鉴定抗p185单克隆抗体的抗原表位并进一步研究它们的相互作用,采用PCR的方法从含Her2/c-erbB-2基因的pBabe/erbB-2质粒中扩增了p185胞外区的富含二硫键的第一、二结构域和第四个结构域.产物克隆到pGEX/4T-1载体后,转化大肠杆菌Origami B(DE3)pLysS菌株,用低浓度IPTG进行低温过夜诱导后将菌体压力破碎,SDS-PAGE检测表达上清,得到了可溶性表达的融合有GST的目的蛋白.经ELISA、Western blot等方法鉴定,可溶性表达产物具有完全的抗体结合活性,且当用凝血酶把GST切掉后该活性仍然保留.p185胞外区融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考;并为将来具有肿瘤细胞生长抑制活性的抗p185单克隆抗体的抗原表位鉴定,以及为EGFR家族受体的结构和功能关系的研究打下基础.
Her2/c-erbB-2기인(기산물위막단백p185)시표피생장인자수체(EGFR)기인가족적일원,재약30%적유선암중발현료기과량표체.위료감정항p185단극륭항체적항원표위병진일보연구타문적상호작용,채용PCR적방법종함Her2/c-erbB-2기인적pBabe/erbB-2질립중확증료p185포외구적부함이류건적제일、이결구역화제사개결구역.산물극륭도pGEX/4T-1재체후,전화대장간균Origami B(DE3)pLysS균주,용저농도IPTG진행저온과야유도후장균체압력파쇄,SDS-PAGE검측표체상청,득도료가용성표체적융합유GST적목적단백.경ELISA、Western blot등방법감정,가용성표체산물구유완전적항체결합활성,차당용응혈매파GST절도후해활성잉연보류.p185포외구융합단백적성공표체장위이류건부함류단백적표체제공삼고;병위장래구유종류세포생장억제활성적항p185단극륭항체적항원표위감정,이급위EGFR가족수체적결구화공능관계적연구타하기출.