山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2006年
5期
433-437,442
,共6页
王志宇%王健伟%何深一%吴围屏%韩金祥%洪涛
王誌宇%王健偉%何深一%吳圍屏%韓金祥%洪濤
왕지우%왕건위%하심일%오위병%한금상%홍도
轮状病毒属%原核细胞%基因表达
輪狀病毒屬%原覈細胞%基因錶達
륜상병독속%원핵세포%기인표체
目的:研究A组轮状病毒(RV)组特异性抗原(VP6)片段的表达,为RV免疫检测技术提供材料.方法:以pcDNA3.1-VP6为模板,通过PCR扩增得到VP6的截短突变体编码基因VP6-1,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合表达载体pGEX-5X,在E.coli中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.通过改变宿主菌、培养基、IPTG浓度和培养温度等条件,提高目的蛋白的可溶性表达水平,使用GST-Sepharose 4B亲合层析进行初步纯化.结果:选定VP6氨基酸12～143片段为目的蛋白,PCR扩增其396bp的编码基因片段,构建出pGEX-5X-VP6-1.将该重组质粒转化E.coli后,SDS-PAGE和Western blotting分析均显示,含有截短VP6蛋白的重组融合蛋白GST::VP6-1在E.coli中获得高效表达,约占菌体总蛋白的30%.该蛋白主要以包涵体形式存在,经条件优化,最终通过低浓度IPTG、低温诱导提高重组蛋白的可溶性表达水平,GST亲和层析可对其进行初步纯化.结论:VP6-1蛋白在E.coli中可被高效表达和纯化,为下一步制备抗VP6的特异性单克隆抗体并用于免疫检测打下基础.
目的:研究A組輪狀病毒(RV)組特異性抗原(VP6)片段的錶達,為RV免疫檢測技術提供材料.方法:以pcDNA3.1-VP6為模闆,通過PCR擴增得到VP6的截短突變體編碼基因VP6-1,將其插入穀胱甘肽巰基轉移酶(GST)融閤錶達載體pGEX-5X,在E.coli中用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達.對錶達產物進行SDS-PAGE和Western blot分析.通過改變宿主菌、培養基、IPTG濃度和培養溫度等條件,提高目的蛋白的可溶性錶達水平,使用GST-Sepharose 4B親閤層析進行初步純化.結果:選定VP6氨基痠12～143片段為目的蛋白,PCR擴增其396bp的編碼基因片段,構建齣pGEX-5X-VP6-1.將該重組質粒轉化E.coli後,SDS-PAGE和Western blotting分析均顯示,含有截短VP6蛋白的重組融閤蛋白GST::VP6-1在E.coli中穫得高效錶達,約佔菌體總蛋白的30%.該蛋白主要以包涵體形式存在,經條件優化,最終通過低濃度IPTG、低溫誘導提高重組蛋白的可溶性錶達水平,GST親和層析可對其進行初步純化.結論:VP6-1蛋白在E.coli中可被高效錶達和純化,為下一步製備抗VP6的特異性單剋隆抗體併用于免疫檢測打下基礎.
목적:연구A조륜상병독(RV)조특이성항원(VP6)편단적표체,위RV면역검측기술제공재료.방법:이pcDNA3.1-VP6위모판,통과PCR확증득도VP6적절단돌변체편마기인VP6-1,장기삽입곡광감태구기전이매(GST)융합표체재체pGEX-5X,재E.coli중용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체.대표체산물진행SDS-PAGE화Western blot분석.통과개변숙주균、배양기、IPTG농도화배양온도등조건,제고목적단백적가용성표체수평,사용GST-Sepharose 4B친합층석진행초보순화.결과:선정VP6안기산12～143편단위목적단백,PCR확증기396bp적편마기인편단,구건출pGEX-5X-VP6-1.장해중조질립전화E.coli후,SDS-PAGE화Western blotting분석균현시,함유절단VP6단백적중조융합단백GST::VP6-1재E.coli중획득고효표체,약점균체총단백적30%.해단백주요이포함체형식존재,경조건우화,최종통과저농도IPTG、저온유도제고중조단백적가용성표체수평,GST친화층석가대기진행초보순화.결론:VP6-1단백재E.coli중가피고효표체화순화,위하일보제비항VP6적특이성단극륭항체병용우면역검측타하기출.
