中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2007年
1期
22-24,28
,共4页
胡慧中%柏佳宁%张静%何宏轩%段明星
鬍慧中%柏佳寧%張靜%何宏軒%段明星
호혜중%백가저%장정%하굉헌%단명성
热休克蛋白%基因克隆%原核表达
熱休剋蛋白%基因剋隆%原覈錶達
열휴극단백%기인극륭%원핵표체
目的 克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因,构建其原核高效表达载体.方法 将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌JM109.挑选阳性克隆,提取质粒pE28b70F,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目标蛋白.结果 在大肠杆菌中成功表达了HSP70,表达量约占细菌总蛋白的22.3%,其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%.Western blot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性.通过Ni2+-NTA亲和柱,从1 L诱导产物中纯化出约15～20 mg重组蛋白,纯度在80%以上.结论 已成功表达HSP70,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础.
目的 剋隆人熱休剋蛋白70(HSP70)基因,構建其原覈高效錶達載體.方法 將PCR擴增的HSP70基因剋隆到原覈高效錶達載體pET-28b中,轉化大腸桿菌JM109.挑選暘性剋隆,提取質粒pE28b70F,轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達目標蛋白.結果 在大腸桿菌中成功錶達瞭HSP70,錶達量約佔細菌總蛋白的22.3%,其中可溶性目標蛋白佔上清總蛋白的12%.Western blot錶明該目標蛋白具有與鼠抗人HSP70單抗特異結閤的抗原活性.通過Ni2+-NTA親和柱,從1 L誘導產物中純化齣約15～20 mg重組蛋白,純度在80%以上.結論 已成功錶達HSP70,為進一步研究其生物學功能和作用機製奠定瞭基礎.
목적 극륭인열휴극단백70(HSP70)기인,구건기원핵고효표체재체.방법 장PCR확증적HSP70기인극륭도원핵고효표체재체pET-28b중,전화대장간균JM109.도선양성극륭,제취질립pE28b70F,전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체목표단백.결과 재대장간균중성공표체료HSP70,표체량약점세균총단백적22.3%,기중가용성목표단백점상청총단백적12%.Western blot표명해목표단백구유여서항인HSP70단항특이결합적항원활성.통과Ni2+-NTA친화주,종1 L유도산물중순화출약15～20 mg중조단백,순도재80%이상.결론 이성공표체HSP70,위진일보연구기생물학공능화작용궤제전정료기출.
