CAJ | 학술논문

[目的]在酵母细胞中蛋白质的糖基磷酸肌醇化(GPI)修饰是将GPI定位于细胞膜或细胞壁的信号.目前已对酵母GPI蛋白的细胞定位信号有一定了解,但对丝状真菌GPI蛋白的定位则了解甚少.AfPhoA是丝状真菌烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的酸性磷酸酯酶,是GPI修饰的蛋白.该蛋白首先分离自细胞膜,随后又发现该蛋白与细胞壁结合.分析其C-端序列也未发现已知的定位信号,因此目前还不能确定其细胞定位.[方法]我们以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告分子,将AfPhoA的C-端序列与GFP的C-端融合后检测融合GFP的细胞定位.[结果]我们用烟曲霉几丁质酶AfChiB1的启动子和N-端信号肽构建了可在烟曲霉中分泌表达GFP的表达载体pchiGFP.在此基础上将AfPhoA的C-端与GFP融合,融合质粒与pCDA14共转化烟曲霉后筛选到一株转化子.该转化子可表达融合GFP,在诱导和非诱导条件下,融合GFP均主要分布在细胞膜上,随培养时间的延长,融合GFP在细胞壁上也有少量分布;在培养上清液中只能检出约30KD的GFP融合蛋白,而没有完整的GFP融合蛋白,推测为从GPI锚上水解释放的.[结论]我们的研究结果表明,AfPhoA蛋白GPI修饰的作用是使该蛋白定位于细胞膜.本研究不仅初步确定了AfPhoA蛋白GPI修饰的细胞膜定位功能,而且为烟曲霉基因与蛋白质功能的研究建立了一个有效表达系统.
[목적]재효모세포중단백질적당기린산기순화(GPI)수식시장GPI정위우세포막혹세포벽적신호.목전이대효모GPI단백적세포정위신호유일정료해,단대사상진균GPI단백적정위칙료해심소.AfPhoA시사상진균연곡매(Aspergillus fumigatus)적산성린산지매,시GPI수식적단백.해단백수선분리자세포막,수후우발현해단백여세포벽결합.분석기C-단서렬야미발현이지적정위신호,인차목전환불능학정기세포정위.[방법]아문이록색형광단백(GFP)작위보고분자,장AfPhoA적C-단서렬여GFP적C-단융합후검측융합GFP적세포정위.[결과]아문용연곡매궤정질매AfChiB1적계동자화N-단신호태구건료가재연곡매중분비표체GFP적표체재체pchiGFP.재차기출상장AfPhoA적C-단여GFP융합,융합질립여pCDA14공전화연곡매후사선도일주전화자.해전화자가표체융합GFP,재유도화비유도조건하,융합GFP균주요분포재세포막상,수배양시간적연장,융합GFP재세포벽상야유소량분포;재배양상청액중지능검출약30KD적GFP융합단백,이몰유완정적GFP융합단백,추측위종GPI묘상수해석방적.[결론]아문적연구결과표명,AfPhoA단백GPI수식적작용시사해단백정위우세포막.본연구불부초보학정료AfPhoA단백GPI수식적세포막정위공능,이차위연곡매기인여단백질공능적연구건립료일개유효표체계통.