激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2009年
1期
12-16
,共5页
王芬%叶霁%曹媛媛%张海生%甘旭华%唐欣昀
王芬%葉霽%曹媛媛%張海生%甘旭華%唐訢昀
왕분%협제%조원원%장해생%감욱화%당흔윤
钝顶螺旋藻%启动子%gfp基因%PEG转化%转化率
鈍頂螺鏇藻%啟動子%gfp基因%PEG轉化%轉化率
둔정라선조%계동자%gfp기인%PEG전화%전화솔
用合适的限制性内切酶消化载体p215t,胶回收获得含有gfp基因及amp基因大片段.设计引物,采用PCR扩增无菌钝顶螺旋藻A9藻株的强启动子片段;在T4连接酶的作用下进行体外连接重组,构建了带有螺旋藻启动子和gfp报告基因的新型表达载体p215t-spp.将该载体转入钝顶螺旋藻,利用报告基因的表达,在荧光显微镜下观察并记录转化藻细胞,p215t-spp质粒显著提高转化率.研究了不同PEG浓度、转化时间及冰浴处理对转化率的影响.采用1%PEG能有效促进细胞吸收DNA,获得10.5‰的转化率.实验初步证明,带有螺旋藻启动子的报告基因gfp能够在钝顶螺旋藻中顺利表达.
用閤適的限製性內切酶消化載體p215t,膠迴收穫得含有gfp基因及amp基因大片段.設計引物,採用PCR擴增無菌鈍頂螺鏇藻A9藻株的彊啟動子片段;在T4連接酶的作用下進行體外連接重組,構建瞭帶有螺鏇藻啟動子和gfp報告基因的新型錶達載體p215t-spp.將該載體轉入鈍頂螺鏇藻,利用報告基因的錶達,在熒光顯微鏡下觀察併記錄轉化藻細胞,p215t-spp質粒顯著提高轉化率.研究瞭不同PEG濃度、轉化時間及冰浴處理對轉化率的影響.採用1%PEG能有效促進細胞吸收DNA,穫得10.5‰的轉化率.實驗初步證明,帶有螺鏇藻啟動子的報告基因gfp能夠在鈍頂螺鏇藻中順利錶達.
용합괄적한제성내절매소화재체p215t,효회수획득함유gfp기인급amp기인대편단.설계인물,채용PCR확증무균둔정라선조A9조주적강계동자편단;재T4련접매적작용하진행체외련접중조,구건료대유라선조계동자화gfp보고기인적신형표체재체p215t-spp.장해재체전입둔정라선조,이용보고기인적표체,재형광현미경하관찰병기록전화조세포,p215t-spp질립현저제고전화솔.연구료불동PEG농도、전화시간급빙욕처리대전화솔적영향.채용1%PEG능유효촉진세포흡수DNA,획득10.5‰적전화솔.실험초보증명,대유라선조계동자적보고기인gfp능구재둔정라선조중순리표체.
