中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2009年
10期
991-995
,共5页
刘发娣%余克花%罗达亚%徐秋芳%莫冰%罗军%刘晶星%黄孝天
劉髮娣%餘剋花%囉達亞%徐鞦芳%莫冰%囉軍%劉晶星%黃孝天
류발제%여극화%라체아%서추방%막빙%라군%류정성%황효천
酵母双杂交%柯萨奇病毒%CVB3%VP1
酵母雙雜交%柯薩奇病毒%CVB3%VP1
효모쌍잡교%가살기병독%CVB3%VP1
目的 以CVB3 VP1为诱饵蛋白,筛选与CVB3 VP1直接作用的人心脏cDNA文库基因,并对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定.方法 酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库;经阳性克隆的表型确定、PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等试验将阳性克隆归类,并进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP1与各阳性蛋白之间相互作用的强弱.结果 在人心脏cDNA文库中筛选到5个阳性克隆,分别为:MNAT1(CAK装配因子),GOLGA2(高尔基体基质蛋白GM130),PHR1(视网膜PH结构域蛋白1),LDB1(LIM结构域结合蛋白1), NADH脱氢酶亚单位4.将筛选的GOLGA2 cDNA新序列提交给NCBI GenBank数据库,获得Accession Number:AY823636;α-半乳糖苷酶定量分析试验进一步证明了MNAT1、GOLGA2、PHR1和LDB1等4个基因与VP1均有较强的相互作用.结论 本研究成功地运用了酵母双杂交技术,以CVB3 VP1为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得5种不同类别的阳性基因:MNAT1、GOLGA2、PHR1、LDB1和NADH脱氢酶亚单位4.
目的 以CVB3 VP1為誘餌蛋白,篩選與CVB3 VP1直接作用的人心髒cDNA文庫基因,併對暘性cDNA剋隆進行初步分析和鑒定.方法 酵母雙雜交技術篩選人心髒cDNA文庫;經暘性剋隆的錶型確定、PCR擴增cDNA插入片段和Alu I酶切等試驗將暘性剋隆歸類,併進行測序和同源性比對分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP1與各暘性蛋白之間相互作用的彊弱.結果 在人心髒cDNA文庫中篩選到5箇暘性剋隆,分彆為:MNAT1(CAK裝配因子),GOLGA2(高爾基體基質蛋白GM130),PHR1(視網膜PH結構域蛋白1),LDB1(LIM結構域結閤蛋白1), NADH脫氫酶亞單位4.將篩選的GOLGA2 cDNA新序列提交給NCBI GenBank數據庫,穫得Accession Number:AY823636;α-半乳糖苷酶定量分析試驗進一步證明瞭MNAT1、GOLGA2、PHR1和LDB1等4箇基因與VP1均有較彊的相互作用.結論 本研究成功地運用瞭酵母雙雜交技術,以CVB3 VP1為誘餌蛋白,從人心髒cDNA文庫中穫得5種不同類彆的暘性基因:MNAT1、GOLGA2、PHR1、LDB1和NADH脫氫酶亞單位4.
목적 이CVB3 VP1위유이단백,사선여CVB3 VP1직접작용적인심장cDNA문고기인,병대양성cDNA극륭진행초보분석화감정.방법 효모쌍잡교기술사선인심장cDNA문고;경양성극륭적표형학정、PCR확증cDNA삽입편단화Alu I매절등시험장양성극륭귀류,병진행측서화동원성비대분석;α-반유당감매활성정량분석VP1여각양성단백지간상호작용적강약.결과 재인심장cDNA문고중사선도5개양성극륭,분별위:MNAT1(CAK장배인자),GOLGA2(고이기체기질단백GM130),PHR1(시망막PH결구역단백1),LDB1(LIM결구역결합단백1), NADH탈경매아단위4.장사선적GOLGA2 cDNA신서렬제교급NCBI GenBank수거고,획득Accession Number:AY823636;α-반유당감매정량분석시험진일보증명료MNAT1、GOLGA2、PHR1화LDB1등4개기인여VP1균유교강적상호작용.결론 본연구성공지운용료효모쌍잡교기술,이CVB3 VP1위유이단백,종인심장cDNA문고중획득5충불동유별적양성기인:MNAT1、GOLGA2、PHR1、LDB1화NADH탈경매아단위4.
