CAJ | 학술논문

通过RNA干扰实验沉默酪蛋白激酶1α(Casein Kinase 1,CK1α)基因,探讨其对肺癌细胞A549生长增殖的影响.首先构建3个针对CK1α基因不同位点的短发夹表达载体pGenesil-CK1α-S1、pGenesil-CK1α-S2、pGen-esil-CK1α-S3和一个无义错配载体pGenesil-NK,分别转染A549细胞,用G418筛选出阳性克隆,得到A549-S1、A549-S2、A549-S3及A549-NK细胞株.再通过RT-PCR和Western blotting方法,分别检测了CK1α基因的mRNA和蛋白的表达情况.比对A549-NK,A549-S1、A549-S2及A549-S3 mRNA水平的抑制率分别为84.3%、57.9%和61.8%(P<0.001);蛋白质水平的抑制率分别为78.4%、51.3%和59.9%(P<0.001).选择干扰效率较好的A549-S1细胞进行后续实验.细胞计数绘制生长曲线、CCK-8法观察细胞增殖状况和流式细胞仪检测细胞所处周期时相来分析转染CK1α基因shRNA表达载体对A549细胞生长增殖的影响.实验结果显示,A549-S1与A549和A549-NK两对照组的平均值比较,细胞计数抑制率为(37.7±2.2)%(P<0.01);CCK-8抑制率为(26.2±1.5)%(P<0.05);S期减少(75.0±4.0)%(P<0.01);G2/M期减少(45.2±5.4)%(P<0.05).因此,转染CK1α基因shRNA表达载体可导致CK1α基因的沉默,明显抑制A549细胞的生长和增殖.
통과RNA간우실험침묵락단백격매1α(Casein Kinase 1,CK1α)기인,탐토기대폐암세포A549생장증식적영향.수선구건3개침대CK1α기인불동위점적단발협표체재체pGenesil-CK1α-S1、pGenesil-CK1α-S2、pGen-esil-CK1α-S3화일개무의착배재체pGenesil-NK,분별전염A549세포,용G418사선출양성극륭,득도A549-S1、A549-S2、A549-S3급A549-NK세포주.재통과RT-PCR화Western blotting방법,분별검측료CK1α기인적mRNA화단백적표체정황.비대A549-NK,A549-S1、A549-S2급A549-S3 mRNA수평적억제솔분별위84.3%、57.9%화61.8%(P<0.001);단백질수평적억제솔분별위78.4%、51.3%화59.9%(P<0.001).선택간우효솔교호적A549-S1세포진행후속실험.세포계수회제생장곡선、CCK-8법관찰세포증식상황화류식세포의검측세포소처주기시상래분석전염CK1α기인shRNA표체재체대A549세포생장증식적영향.실험결과현시,A549-S1여A549화A549-NK량대조조적평균치비교,세포계수억제솔위(37.7±2.2)%(P<0.01);CCK-8억제솔위(26.2±1.5)%(P<0.05);S기감소(75.0±4.0)%(P<0.01);G2/M기감소(45.2±5.4)%(P<0.05).인차,전염CK1α기인shRNA표체재체가도치CK1α기인적침묵,명현억제A549세포적생장화증식.