浙江理工大学学报
浙江理工大學學報
절강리공대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY
2010年
4期
649-653
,共5页
曹俊伟%马利兵%何晓宁%舒建洪%张涌
曹俊偉%馬利兵%何曉寧%舒建洪%張湧
조준위%마리병%하효저%서건홍%장용
人溶菌酶%人乳铁蛋白%绿色荧光蛋白%牛乳腺上皮细胞
人溶菌酶%人乳鐵蛋白%綠色熒光蛋白%牛乳腺上皮細胞
인용균매%인유철단백%록색형광단백%우유선상피세포
研究检测人溶菌酶/乳铁蛋白双基因重组质粒pEBH-IL在牛乳腺上皮细胞中的表达.采用脂质体转染技术,将pEBH-IL质粒DNA导入体外培养的牛乳腺上皮细胞中.加入G418对转染的细胞加压筛选,获得稳定转染的细胞.采用绿色荧光蛋白(EGFP)和PCR方法检测牛乳腺细胞基因组中的目的基因,并采用Westhorn Blot对重组质粒在牛乳腺细胞表达产物进行检测.试验表明:G418筛选获得稳定转染的细胞,对照组加压后第7 d细胞全部死亡,转染组第12～15 d汇片达80%左右;在荧光显微镜下观察到EGFP表达;PCR检测到目的基因;阳性细胞培养液中检测到目的蛋白的表达.结果表明:以人溶菌酶/乳铁蛋白为目的基因构建的重组质粒pEBH-IL在牛乳腺细胞中具有表达功能.
研究檢測人溶菌酶/乳鐵蛋白雙基因重組質粒pEBH-IL在牛乳腺上皮細胞中的錶達.採用脂質體轉染技術,將pEBH-IL質粒DNA導入體外培養的牛乳腺上皮細胞中.加入G418對轉染的細胞加壓篩選,穫得穩定轉染的細胞.採用綠色熒光蛋白(EGFP)和PCR方法檢測牛乳腺細胞基因組中的目的基因,併採用Westhorn Blot對重組質粒在牛乳腺細胞錶達產物進行檢測.試驗錶明:G418篩選穫得穩定轉染的細胞,對照組加壓後第7 d細胞全部死亡,轉染組第12～15 d彙片達80%左右;在熒光顯微鏡下觀察到EGFP錶達;PCR檢測到目的基因;暘性細胞培養液中檢測到目的蛋白的錶達.結果錶明:以人溶菌酶/乳鐵蛋白為目的基因構建的重組質粒pEBH-IL在牛乳腺細胞中具有錶達功能.
연구검측인용균매/유철단백쌍기인중조질립pEBH-IL재우유선상피세포중적표체.채용지질체전염기술,장pEBH-IL질립DNA도입체외배양적우유선상피세포중.가입G418대전염적세포가압사선,획득은정전염적세포.채용록색형광단백(EGFP)화PCR방법검측우유선세포기인조중적목적기인,병채용Westhorn Blot대중조질립재우유선세포표체산물진행검측.시험표명:G418사선획득은정전염적세포,대조조가압후제7 d세포전부사망,전염조제12～15 d회편체80%좌우;재형광현미경하관찰도EGFP표체;PCR검측도목적기인;양성세포배양액중검측도목적단백적표체.결과표명:이인용균매/유철단백위목적기인구건적중조질립pEBH-IL재우유선세포중구유표체공능.
