现代医药卫生
現代醫藥衛生
현대의약위생
MODERN MEDICINE HEALTH
2011年
2期
177-180
,共4页
陈陵%熊晓峰%高军%邹利全%张方征%王洪斌
陳陵%熊曉峰%高軍%鄒利全%張方徵%王洪斌
진릉%웅효봉%고군%추리전%장방정%왕홍빈
微RNAs%慢病毒属%人端粒酶逆转录酶%转录后调控
微RNAs%慢病毒屬%人耑粒酶逆轉錄酶%轉錄後調控
미RNAs%만병독속%인단립매역전록매%전록후조공
目的:构建hTERT(人端粒酶逆转录酶)调控相关miR-138慢病毒表达载体.方法:化学合成miR-138前体序列,连接到包含U6启动子及GFP(绿色荧光蛋白)报告基因的慢病毒载体pGCL-GFP中,获得重组质粒,经双酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0共转染至HEK 293T细胞包装病毒,并对病毒进行鉴定.结果:双酶切和测序结果证实miR-138前体核苷酸链序列捕入正确,包装的慢病毒滴度达7×107TU/ml;包装成功的慢病毒可有效增加感染细胞内miR-138的表达丰度,并可下调hTERT表达水平.结论:成功包装并鉴定人miR-138慢病毒表达载体.
目的:構建hTERT(人耑粒酶逆轉錄酶)調控相關miR-138慢病毒錶達載體.方法:化學閤成miR-138前體序列,連接到包含U6啟動子及GFP(綠色熒光蛋白)報告基因的慢病毒載體pGCL-GFP中,穫得重組質粒,經雙酶切和測序鑒定後,與慢病毒包裝質粒pHelper 1.0及pHelper 2.0共轉染至HEK 293T細胞包裝病毒,併對病毒進行鑒定.結果:雙酶切和測序結果證實miR-138前體覈苷痠鏈序列捕入正確,包裝的慢病毒滴度達7×107TU/ml;包裝成功的慢病毒可有效增加感染細胞內miR-138的錶達豐度,併可下調hTERT錶達水平.結論:成功包裝併鑒定人miR-138慢病毒錶達載體.
목적:구건hTERT(인단립매역전록매)조공상관miR-138만병독표체재체.방법:화학합성miR-138전체서렬,련접도포함U6계동자급GFP(록색형광단백)보고기인적만병독재체pGCL-GFP중,획득중조질립,경쌍매절화측서감정후,여만병독포장질립pHelper 1.0급pHelper 2.0공전염지HEK 293T세포포장병독,병대병독진행감정.결과:쌍매절화측서결과증실miR-138전체핵감산련서렬포입정학,포장적만병독적도체7×107TU/ml;포장성공적만병독가유효증가감염세포내miR-138적표체봉도,병가하조hTERT표체수평.결론:성공포장병감정인miR-138만병독표체재체.
