CAJ | 학술논문

目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)基因转染体外培养的人成釉细胞瘤(AM) 细胞侵袭性生物学行为的改变,进一步研究MMP-2、TIMP-2与AM局部侵袭性的关系.方法 pcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2质粒转染人AM细胞.空白对照组:不加任何处理因素;脂质体对照组:加入4 μL Lipo-fe ctamine 2000和250 μL Opti-MEMⅠ混合物;转染阴性载体对照组(P0):转染2 μg阴性对照质粒pcDNA3.1(+)/GFP;实验组:分别转染不同浓度的质粒pcDNA3.1(+)/GFP-TIMPI 1 μg(P1)、2 μg(P2)、3 μg(P3).倒置相差荧光显微镜观察转染情况,流式细胞仪测定转染效率.明胶酶谱法检测基质蛋白酶-2(MMP-2)的活性.逆向明胶酶谱法检测TIMP-2的活性.RT-PCR分析MMP-2 以及TIMP-2 mRNA的表达.Western blot分析MMP-2及TIMP-2蛋白的表达情况.三维培养观察分析细胞生长状况.Transwell 微侵袭分析.结果与空白对照组比较,不同浓度质粒转染组的MMP-2均有不同程度的抑制,差异有显著性(P＜0.05); 72 h MMP-2抑制率为54.38%.TIMP-2的活性均有不同程度的增加,差异有统计学意义(P＜0.05); 72 h的TIMP-2增加率为43.75%.MMP-2蛋白表达水平P2明显低于P1、P3组,差异有统计学意义(P＜0.05);与空白对照组比较,转染72 h后,不同质粒组的MMP-2 蛋白表达水平的抑制率分别为16.1%、45.3%及39.6%.不同浓度组的TIMP-2 蛋白表达水平的增加率分别为26.1%、61.3%及32.6%.在Transwell 中培养72 h 后,各对照组之间细胞的细胞计数差异无统计学意义(P＞0.05);与空白对照组比较,质粒转染组Transwell下室细胞的细胞数明显减少(P＜0.05).两组的相对侵袭抑制率分别为53.7%及46.9%.结论 TIMP-2基因转染AM细胞后,TIMP-2的mRNA及蛋白表达增加,蛋白活性亦增加;MMP-2 mRNA表达量无明显改变,其蛋白表达量及活性降低.细胞的侵袭性被部分抑制,可能机制是TIMP-2基因过表达使MMP-2活性降低所致.TIMP-2及MMP-2以及两者的关系可能是影响AM局部侵袭性生长的原因之一. 目的探討基質金屬蛋白酶組織抑製劑-2(TIMP-2)基因轉染體外培養的人成釉細胞瘤(AM) 細胞侵襲性生物學行為的改變,進一步研究MMP-2、TIMP-2與AM跼部侵襲性的關繫.方法 pcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2質粒轉染人AM細胞.空白對照組:不加任何處理因素;脂質體對照組:加入4 μL Lipo-fe ctamine 2000和250 μL Opti-MEMⅠ混閤物;轉染陰性載體對照組(P0):轉染2 μg陰性對照質粒pcDNA3.1(+)/GFP;實驗組:分彆轉染不同濃度的質粒pcDNA3.1(+)/GFP-TIMPI 1 μg(P1)、2 μg(P2)、3 μg(P3).倒置相差熒光顯微鏡觀察轉染情況,流式細胞儀測定轉染效率.明膠酶譜法檢測基質蛋白酶-2(MMP-2)的活性.逆嚮明膠酶譜法檢測TIMP-2的活性.RT-PCR分析MMP-2 以及TIMP-2 mRNA的錶達.Western blot分析MMP-2及TIMP-2蛋白的錶達情況.三維培養觀察分析細胞生長狀況.Transwell 微侵襲分析.結果與空白對照組比較,不同濃度質粒轉染組的MMP-2均有不同程度的抑製,差異有顯著性(P＜0.05); 72 h MMP-2抑製率為54.38%.TIMP-2的活性均有不同程度的增加,差異有統計學意義(P＜0.05); 72 h的TIMP-2增加率為43.75%.MMP-2蛋白錶達水平P2明顯低于P1、P3組,差異有統計學意義(P＜0.05);與空白對照組比較,轉染72 h後,不同質粒組的MMP-2 蛋白錶達水平的抑製率分彆為16.1%、45.3%及39.6%.不同濃度組的TIMP-2 蛋白錶達水平的增加率分彆為26.1%、61.3%及32.6%.在Transwell 中培養72 h 後,各對照組之間細胞的細胞計數差異無統計學意義(P＞0.05);與空白對照組比較,質粒轉染組Transwell下室細胞的細胞數明顯減少(P＜0.05).兩組的相對侵襲抑製率分彆為53.7%及46.9%.結論 TIMP-2基因轉染AM細胞後,TIMP-2的mRNA及蛋白錶達增加,蛋白活性亦增加;MMP-2 mRNA錶達量無明顯改變,其蛋白錶達量及活性降低.細胞的侵襲性被部分抑製,可能機製是TIMP-2基因過錶達使MMP-2活性降低所緻.TIMP-2及MMP-2以及兩者的關繫可能是影響AM跼部侵襲性生長的原因之一.
목적 탐토기질금속단백매조직억제제-2(TIMP-2)기인전염체외배양적인성유세포류(AM) 세포침습성생물학행위적개변,진일보연구MMP-2、TIMP-2여AM국부침습성적관계.방법 pcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2질립전염인AM세포.공백대조조:불가임하처리인소;지질체대조조:가입4 μL Lipo-fe ctamine 2000화250 μL Opti-MEMⅠ혼합물;전염음성재체대조조(P0):전염2 μg음성대조질립pcDNA3.1(+)/GFP;실험조:분별전염불동농도적질립pcDNA3.1(+)/GFP-TIMPI 1 μg(P1)、2 μg(P2)、3 μg(P3).도치상차형광현미경관찰전염정황,류식세포의측정전염효솔.명효매보법검측기질단백매-2(MMP-2)적활성.역향명효매보법검측TIMP-2적활성.RT-PCR분석MMP-2 이급TIMP-2 mRNA적표체.Western blot분석MMP-2급TIMP-2단백적표체정황.삼유배양관찰분석세포생장상황.Transwell 미침습분석.결과 여공백대조조비교,불동농도질립전염조적MMP-2균유불동정도적억제,차이유현저성(P＜0.05); 72 h MMP-2억제솔위54.38%.TIMP-2적활성균유불동정도적증가,차이유통계학의의(P＜0.05); 72 h적TIMP-2증가솔위43.75%.MMP-2단백표체수평P2명현저우P1、P3조,차이유통계학의의(P＜0.05);여공백대조조비교,전염72 h후,불동질립조적MMP-2 단백표체수평적억제솔분별위16.1%、45.3%급39.6%.불동농도조적TIMP-2 단백표체수평적증가솔분별위26.1%、61.3%급32.6%.재Transwell 중배양72 h 후,각대조조지간세포적세포계수차이무통계학의의(P＞0.05);여공백대조조비교,질립전염조Transwell하실세포적세포수명현감소(P＜0.05).량조적상대침습억제솔분별위53.7%급46.9%.결론 TIMP-2기인전염AM세포후,TIMP-2적mRNA급단백표체증가,단백활성역증가;MMP-2 mRNA표체량무명현개변,기단백표체량급활성강저.세포적침습성피부분억제,가능궤제시TIMP-2기인과표체사MMP-2활성강저소치.TIMP-2급MMP-2이급량자적관계가능시영향AM국부침습성생장적원인지일.