细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2004年
3期
274-277
,共4页
黄云剑%赵景宏%杨唐俊%张金海%蔡文琴
黃雲劍%趙景宏%楊唐俊%張金海%蔡文琴
황운검%조경굉%양당준%장금해%채문금
Smad 6%Smad 7%腺相关病毒载体%TGF-β%基因转染%肾小管上皮细胞
Smad 6%Smad 7%腺相關病毒載體%TGF-β%基因轉染%腎小管上皮細胞
Smad 6%Smad 7%선상관병독재체%TGF-β%기인전염%신소관상피세포
目的: 构建Smad 6和Smad 7基因腺相关病毒(AAV)载体, 并转染到人肾小管上皮细胞中表达.方法: 利用基因重组技术, 采用BamH I和Xho I双酶分别将pcDNA3中的目的基因Smad 6/flag和Smad 7/flag融合基因片断切出, 再克隆到质粒pAAV-MCS中, 构建重组质粒pAA-Smad 6/flag和pAA-Smad 7/flag.采用磷酸钙沉淀法, 以重组质粒或pAAV-LacZ以及pAAV-RC、pHelper共转染HEK293细胞, 产生均有传染性的病毒颗粒.再将此病毒颗粒转染到培养的人肾小管细胞中, 用免疫组化法检测其Smad 6和Smad 7转移基因的表达.结果: 成功地构建Smad 6和Smad 7基因的腺相关病毒载体, 并可在肾小管上皮细胞中表达Smad 6和Smad 7.结论: 肾小管细胞能稳定、高效表达外源Smad 6和Smad 7, 为今后建立Smad 6和Smad 7 AAV基因治疗体内肾纤维化的模型奠定了良好的基础.
目的: 構建Smad 6和Smad 7基因腺相關病毒(AAV)載體, 併轉染到人腎小管上皮細胞中錶達.方法: 利用基因重組技術, 採用BamH I和Xho I雙酶分彆將pcDNA3中的目的基因Smad 6/flag和Smad 7/flag融閤基因片斷切齣, 再剋隆到質粒pAAV-MCS中, 構建重組質粒pAA-Smad 6/flag和pAA-Smad 7/flag.採用燐痠鈣沉澱法, 以重組質粒或pAAV-LacZ以及pAAV-RC、pHelper共轉染HEK293細胞, 產生均有傳染性的病毒顆粒.再將此病毒顆粒轉染到培養的人腎小管細胞中, 用免疫組化法檢測其Smad 6和Smad 7轉移基因的錶達.結果: 成功地構建Smad 6和Smad 7基因的腺相關病毒載體, 併可在腎小管上皮細胞中錶達Smad 6和Smad 7.結論: 腎小管細胞能穩定、高效錶達外源Smad 6和Smad 7, 為今後建立Smad 6和Smad 7 AAV基因治療體內腎纖維化的模型奠定瞭良好的基礎.
목적: 구건Smad 6화Smad 7기인선상관병독(AAV)재체, 병전염도인신소관상피세포중표체.방법: 이용기인중조기술, 채용BamH I화Xho I쌍매분별장pcDNA3중적목적기인Smad 6/flag화Smad 7/flag융합기인편단절출, 재극륭도질립pAAV-MCS중, 구건중조질립pAA-Smad 6/flag화pAA-Smad 7/flag.채용린산개침정법, 이중조질립혹pAAV-LacZ이급pAAV-RC、pHelper공전염HEK293세포, 산생균유전염성적병독과립.재장차병독과립전염도배양적인신소관세포중, 용면역조화법검측기Smad 6화Smad 7전이기인적표체.결과: 성공지구건Smad 6화Smad 7기인적선상관병독재체, 병가재신소관상피세포중표체Smad 6화Smad 7.결론: 신소관세포능은정、고효표체외원Smad 6화Smad 7, 위금후건립Smad 6화Smad 7 AAV기인치료체내신섬유화적모형전정료량호적기출.
