第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2005年
10期
957-959
,共3页
李春明%杨春艳%刘宝林%王太和%张秋容
李春明%楊春豔%劉寶林%王太和%張鞦容
리춘명%양춘염%류보림%왕태화%장추용
成纤维细胞生长因子2%克隆,分子%遗传载体
成纖維細胞生長因子2%剋隆,分子%遺傳載體
성섬유세포생장인자2%극륭,분자%유전재체
目的: 构建研究人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)真核表达载体,并在体外进行表达和检测.方法: 从骨髓基质干细胞中分离总RNA,进行RT-PCR 获得人bFGF cDNA.测序证实其结果正确后,构建真核表达载体.并经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定.利用Blast程序,搜索NCBI GenBank中与重组质粒(pVAX1-bFGF)中编码bFGF基因同源的序列.通过脂质体将重组质粒转染入骨髓基质干细胞,使用间接免疫荧光法进行表达产物检测.结果: 经EcoRⅠ/Pst BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定证实,人bFGF基因成功地克隆到真核表达载体pVAX1中;pVAX1- bFGF中编码bFGF的序列与GenBank中所报道的bFGF编码序列完全一致;间接免疫荧光结果显示转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光.结论: 成功地构建了人bFGF真核表达载体,其可以在体外进行表达.
目的: 構建研究人堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)真覈錶達載體,併在體外進行錶達和檢測.方法: 從骨髓基質榦細胞中分離總RNA,進行RT-PCR 穫得人bFGF cDNA.測序證實其結果正確後,構建真覈錶達載體.併經BamHⅠ/EcoRⅠ雙酶切、PCR及測序鑒定.利用Blast程序,搜索NCBI GenBank中與重組質粒(pVAX1-bFGF)中編碼bFGF基因同源的序列.通過脂質體將重組質粒轉染入骨髓基質榦細胞,使用間接免疫熒光法進行錶達產物檢測.結果: 經EcoRⅠ/Pst BamHⅠ/EcoRⅠ雙酶切、PCR及測序鑒定證實,人bFGF基因成功地剋隆到真覈錶達載體pVAX1中;pVAX1- bFGF中編碼bFGF的序列與GenBank中所報道的bFGF編碼序列完全一緻;間接免疫熒光結果顯示轉染重組質粒的細胞錶麵有綠色熒光.結論: 成功地構建瞭人bFGF真覈錶達載體,其可以在體外進行錶達.
목적: 구건연구인감성성섬유세포생장인자(bFGF)진핵표체재체,병재체외진행표체화검측.방법: 종골수기질간세포중분리총RNA,진행RT-PCR 획득인bFGF cDNA.측서증실기결과정학후,구건진핵표체재체.병경BamHⅠ/EcoRⅠ쌍매절、PCR급측서감정.이용Blast정서,수색NCBI GenBank중여중조질립(pVAX1-bFGF)중편마bFGF기인동원적서렬.통과지질체장중조질립전염입골수기질간세포,사용간접면역형광법진행표체산물검측.결과: 경EcoRⅠ/Pst BamHⅠ/EcoRⅠ쌍매절、PCR급측서감정증실,인bFGF기인성공지극륭도진핵표체재체pVAX1중;pVAX1- bFGF중편마bFGF적서렬여GenBank중소보도적bFGF편마서렬완전일치;간접면역형광결과현시전염중조질립적세포표면유록색형광.결론: 성공지구건료인bFGF진핵표체재체,기가이재체외진행표체.
