CAJ | 학술논문

通过将展示单链抗体(scFv)文库的M13噬菌体固定于冷凝胶整体柱表面制备了一种新型蛋白质均衡器.由于展示的scFv片段具有种类多、数目大以及与蛋白质结合的特异性强等优点,因此其非常适合用于复杂蛋白质样品的预处理.将肾病患者尿蛋白在平衡器上反复上样5次后,依次使用2 mol/L NaCl、50 mmol/L Gly-HCl(pH 2.5)和凝血酶溶液洗脱与均衡器结合的蛋白质,收集各馏分,并采用串联微柱反相液相色谱-电喷雾质谱进行蛋白质的分离鉴定.与未经均衡器处理的样品相比,鉴定的蛋白质数目由142个提高到396个.此外,凝胶电泳的分析结果显示,在上样流出液中蛋白质的浓度差异明显变小,大量的高丰度蛋白质存在于NaCl洗脱液中.上述结果表明,基于M13噬菌体展示scFv文库的新型蛋白质均衡器能够有效减小样品中蛋白质的浓度差异,有利于发现更多的低丰度蛋白质.
통과장전시단련항체(scFv)문고적M13서균체고정우냉응효정체주표면제비료일충신형단백질균형기.유우전시적scFv편단구유충류다、수목대이급여단백질결합적특이성강등우점,인차기비상괄합용우복잡단백질양품적예처리.장신병환자뇨단백재평형기상반복상양5차후,의차사용2 mol/L NaCl、50 mmol/L Gly-HCl(pH 2.5)화응혈매용액세탈여균형기결합적단백질,수집각류분,병채용천련미주반상액상색보-전분무질보진행단백질적분리감정.여미경균형기처리적양품상비,감정적단백질수목유142개제고도396개.차외,응효전영적분석결과현시,재상양류출액중단백질적농도차이명현변소,대량적고봉도단백질존재우NaCl세탈액중.상술결과표명,기우M13서균체전시scFv문고적신형단백질균형기능구유효감소양품중단백질적농도차이,유리우발현경다적저봉도단백질.