连续3次缺口修复构建小鼠乳清酸蛋白-人血清白蛋白杂合基因座
련속3차결구수복구건소서유청산단백-인혈청백단백잡합기인좌
A Successive Three-Step Gap-Repair Method to Generate the mWAP-hSA Hybrid Gene Locus
  • 万方数据
    生物技术通讯 생물기술통신
    LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
    2012年 3期 375-379 ,共5页

    吴晓洁%林艳丽%施庚寿%熊福银%周艳荣%吕月蒙%邓继先%陈昭烈%陈红星

    오효길%림염려%시경수%웅복은%주염영%려월몽%산계선%진소렬%진홍성

    小鼠乳清酸蛋白%人血清白蛋白%缺口修复%细菌人工染色体 小鼠乳清痠蛋白%人血清白蛋白%缺口脩複%細菌人工染色體
    소서유청산단백%인혈청백단백%결구수복%세균인공염색체
    目的:构建人血清白蛋白(hSA)与小鼠乳清酸蛋白(mWAP)调控序列的杂合基因座.方法与结果:在pBR322载体上连入预先无痕连接的3对同源臂,利用基于Red同源重组系统的缺口修复(gap-repair)技术,分别对8kb的mWAP基因座3'调控区、16 kb的hSA基因组编码序列及13 kb的mWAP基因座5'调控区进行连续3次基因抓捕,最终将全长37 kb的乳蛋白杂合基因座构入pBR322载体；通过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,确定mWAP基因座中的编码序列被精确地置换为hSA的基因组编码序列.结论:构建了整合有mWAP-hSA杂合基因座的pBR322载体,为研究杂合基因座在乳腺中的表达效果及置换型基因座表达的可行性提供了数据.
    목적:구건인혈청백단백(hSA)여소서유청산단백(mWAP)조공서렬적잡합기인좌.방법여결과:재pBR322재체상련입예선무흔련접적3대동원비,이용기우Red동원중조계통적결구수복(gap-repair)기술,분별대8kb적mWAP기인좌3'조공구、16 kb적hSA기인조편마서렬급13 kb적mWAP기인좌5'조공구진행련속3차기인조포,최종장전장37 kb적유단백잡합기인좌구입pBR322재체；통과PCR확증、한제성내절매소화화서렬측정험증,학정mWAP기인좌중적편마서렬피정학지치환위hSA적기인조편마서렬.결론:구건료정합유mWAP-hSA잡합기인좌적pBR322재체,위연구잡합기인좌재유선중적표체효과급치환형기인좌표체적가행성제공료수거.
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