分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2012年
3期
371-379
,共9页
闫晓红%王慧%叶艳英%曾钢%马荣才%米福贵%姚磊
閆曉紅%王慧%葉豔英%曾鋼%馬榮纔%米福貴%姚磊
염효홍%왕혜%협염영%증강%마영재%미복귀%요뢰
LoxP-FRT融合位点%植物表达双元载体%农杆菌介导%植物遗传转化%标记基因删除
LoxP-FRT融閤位點%植物錶達雙元載體%農桿菌介導%植物遺傳轉化%標記基因刪除
LoxP-FRT융합위점%식물표체쌍원재체%농간균개도%식물유전전화%표기기인산제
在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的植物遗传转化中,常常需要用到植物表达双元载体.为便于基因工程操作并能在获得转基因植物后方便将标记基因删除,我们构建了植物表达双元载体pYBA100,以满足用于生产安全转基因植物的需要.本研究通过融合PCR方法,尽可能去除所有非必需的序列,将pYBA载体最小化.pYBA载体在大肠杆菌中为多拷贝,骨架为3.69 kb.我们构建的含NptⅡ植物筛选标记基因的载体pYBA100仅为5.37 kb,多克隆位点为22个,方便基因工程操作.载体pYBA100的T-DNA植物筛选基因表达框两侧预留有Lox P-FRT融合位点,方便在获得转基因植物后通过Cre或FLP重组酶将植物筛选标记基因删除.pYBA100载体能于大肠杆菌和农杆菌中自我复制,并成功转化了拟南芥,符合农杆菌介导的植物转基因要求.离体删除实验结果证明,载体pYBA100能经Cre重组酶删除植物标记基因表达框.
在農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導的植物遺傳轉化中,常常需要用到植物錶達雙元載體.為便于基因工程操作併能在穫得轉基因植物後方便將標記基因刪除,我們構建瞭植物錶達雙元載體pYBA100,以滿足用于生產安全轉基因植物的需要.本研究通過融閤PCR方法,儘可能去除所有非必需的序列,將pYBA載體最小化.pYBA載體在大腸桿菌中為多拷貝,骨架為3.69 kb.我們構建的含NptⅡ植物篩選標記基因的載體pYBA100僅為5.37 kb,多剋隆位點為22箇,方便基因工程操作.載體pYBA100的T-DNA植物篩選基因錶達框兩側預留有Lox P-FRT融閤位點,方便在穫得轉基因植物後通過Cre或FLP重組酶將植物篩選標記基因刪除.pYBA100載體能于大腸桿菌和農桿菌中自我複製,併成功轉化瞭擬南芥,符閤農桿菌介導的植物轉基因要求.離體刪除實驗結果證明,載體pYBA100能經Cre重組酶刪除植物標記基因錶達框.
재농간균(Agrobacterium tumefaciens)개도적식물유전전화중,상상수요용도식물표체쌍원재체.위편우기인공정조작병능재획득전기인식물후방편장표기기인산제,아문구건료식물표체쌍원재체pYBA100,이만족용우생산안전전기인식물적수요.본연구통과융합PCR방법,진가능거제소유비필수적서렬,장pYBA재체최소화.pYBA재체재대장간균중위다고패,골가위3.69 kb.아문구건적함NptⅡ식물사선표기기인적재체pYBA100부위5.37 kb,다극륭위점위22개,방편기인공정조작.재체pYBA100적T-DNA식물사선기인표체광량측예류유Lox P-FRT융합위점,방편재획득전기인식물후통과Cre혹FLP중조매장식물사선표기기인산제.pYBA100재체능우대장간균화농간균중자아복제,병성공전화료의남개,부합농간균개도적식물전기인요구.리체산제실험결과증명,재체pYBA100능경Cre중조매산제식물표기기인표체광.
