河南师范大学学报（自然科学版）
河南師範大學學報（自然科學版）
하남사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HENAN NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2012年
4期
98-102
,共5页
白雪%马瑜%陈百宝%胡岩岩%李芬
白雪%馬瑜%陳百寶%鬍巖巖%李芬
백설%마유%진백보%호암암%리분
酵母Elp3%毕赤酵母%分泌表达%活性测定
酵母Elp3%畢赤酵母%分泌錶達%活性測定
효모Elp3%필적효모%분비표체%활성측정
酵母Elp3是Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸.生物信息学分析及有关研究表明Elp3除组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)活性外,可能还拥有组蛋白去甲基化酶活性.本文以yElp3的pYES2yElp3质粒为模板,PCR获得yElp3基因全长,插入改造过的毕赤酵母表达载体pPIC9KH,转化巴斯德毕赤酵母GS115菌株.经表型鉴定、PCR分析及G418筛选获Mut+型多拷贝整合菌,经0.5％的甲醇诱导和Ni-NTA纯化,得到目的蛋白并对其进行体外酶活测定.SDS-PAGE分析表明yElp3在毕赤酵母中实现了高效分泌表达,Western印迹证实得到的蛋白为yElp3.OPA法测得纯化蛋白拥有较好的HAT活性,具有生物活性的Elp3蛋白的获得为体外测定其第二结构域是否有催化活性奠定了基础.
酵母Elp3是Elongator複閤物的催化亞基,可參與組蛋白乙酰化脩飾與基因轉錄延伸.生物信息學分析及有關研究錶明Elp3除組蛋白乙酰轉移酶(Histone acetyltranferase,HAT)活性外,可能還擁有組蛋白去甲基化酶活性.本文以yElp3的pYES2yElp3質粒為模闆,PCR穫得yElp3基因全長,插入改造過的畢赤酵母錶達載體pPIC9KH,轉化巴斯德畢赤酵母GS115菌株.經錶型鑒定、PCR分析及G418篩選穫Mut+型多拷貝整閤菌,經0.5％的甲醇誘導和Ni-NTA純化,得到目的蛋白併對其進行體外酶活測定.SDS-PAGE分析錶明yElp3在畢赤酵母中實現瞭高效分泌錶達,Western印跡證實得到的蛋白為yElp3.OPA法測得純化蛋白擁有較好的HAT活性,具有生物活性的Elp3蛋白的穫得為體外測定其第二結構域是否有催化活性奠定瞭基礎.
효모Elp3시Elongator복합물적최화아기,가삼여조단백을선화수식여기인전록연신.생물신식학분석급유관연구표명Elp3제조단백을선전이매(Histone acetyltranferase,HAT)활성외,가능환옹유조단백거갑기화매활성.본문이yElp3적pYES2yElp3질립위모판,PCR획득yElp3기인전장,삽입개조과적필적효모표체재체pPIC9KH,전화파사덕필적효모GS115균주.경표형감정、PCR분석급G418사선획Mut+형다고패정합균,경0.5％적갑순유도화Ni-NTA순화,득도목적단백병대기진행체외매활측정.SDS-PAGE분석표명yElp3재필적효모중실현료고효분비표체,Western인적증실득도적단백위yElp3.OPA법측득순화단백옹유교호적HAT활성,구유생물활성적Elp3단백적획득위체외측정기제이결구역시부유최화활성전정료기출.
