CAJ | 학술논문

目的:构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(Hemagglutinin-neuramidinase,HN)基因的重组腺病毒,为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础.方法:用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切质粒pVHN,将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5 CMV K-N pA,构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组病毒可有效表达HN基因,表达产物分子量约为63 kD,重组病毒滴度为108～1010 PFU/ml.结论:成功构建含HN基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.
목적:구건표체신성역병독혈응소-신경안산매(Hemagglutinin-neuramidinase,HN)기인적중조선병독,위진일보연구HN기인대소화도종류적억제작용급분자궤제건립기출.방법:용BamHⅠ화XbaⅠ쌍매절질립pVHN,장획득적HN기인편단련접입천사질립pacAd5 CMV K-N pA,구건함HN기인적천사질립pacAd5-HN.이용PacⅠ단매절대pacAd5-HN화선병독기인조질립(pAd5)진행선성화처리후응용지질체개도법공전염AAV-293세포,분별이용식반순화화RT-PCR、Western blot등방법대중조병독진행사선화감정,병측정소획득중조병독적적도.결과:소구건중조병독가유효표체HN기인,표체산물분자량약위63 kD,중조병독적도위108～1010 PFU/ml.결론:성공구건함HN기인적중조선병독,소획득중조병독적적도가이만족체내외실험요구.