畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2009年
9期
1327-1332
,共6页
白昌明%王新庄%闫颖颖%和小娥%张静芳
白昌明%王新莊%閆穎穎%和小娥%張靜芳
백창명%왕신장%염영영%화소아%장정방
绵羊类ES细胞%小鼠ES细胞条件培养基%自我更新
綿羊類ES細胞%小鼠ES細胞條件培養基%自我更新
면양류ES세포%소서ES세포조건배양기%자아경신
本研究以无血清培养基为基础培养液,旨在探求小鼠ES细胞条件培养液(ESCCM)和2种不同饲养层对绵羊类ES细胞分离、克隆效率的影响.绵羊内细胞团从胚胎中分离得到后,分别以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)和绵羊胎儿成纤维细胞(SEF)为饲养层进行培养.结果在MEF饲养层上,绵羊类ES细胞在ESCCM新培养系统中可稳定传至第10代,而使用基础培养液最多传至5代.而在SEF饲养层上,绵羊类ES细胞在ESCCM新培养系统中仅能传至3代.表明使用ESCCM和MEF能促进绵羊类ES细胞的分离和克隆.对类ES细胞进行核型分析、AKP染色及体外分化能力检测,证实所分离的类ES细胞符合ES细胞的主要特征,而且发现这些类ES细胞可以表达胚胎干细胞关键转录因子Nanog.结果表明,ESCCM可显著提高绵羊类ES细胞的分离克隆效率,原因可能是小鼠ES细胞在生长过程中可能分泌某些重要的细胞因子,从而达到促进绵羊ES细胞增殖的作用.且MEF比SEF更适合于绵羊类ES细胞的分离和传代.
本研究以無血清培養基為基礎培養液,旨在探求小鼠ES細胞條件培養液(ESCCM)和2種不同飼養層對綿羊類ES細胞分離、剋隆效率的影響.綿羊內細胞糰從胚胎中分離得到後,分彆以小鼠胎兒成纖維細胞(MEF)和綿羊胎兒成纖維細胞(SEF)為飼養層進行培養.結果在MEF飼養層上,綿羊類ES細胞在ESCCM新培養繫統中可穩定傳至第10代,而使用基礎培養液最多傳至5代.而在SEF飼養層上,綿羊類ES細胞在ESCCM新培養繫統中僅能傳至3代.錶明使用ESCCM和MEF能促進綿羊類ES細胞的分離和剋隆.對類ES細胞進行覈型分析、AKP染色及體外分化能力檢測,證實所分離的類ES細胞符閤ES細胞的主要特徵,而且髮現這些類ES細胞可以錶達胚胎榦細胞關鍵轉錄因子Nanog.結果錶明,ESCCM可顯著提高綿羊類ES細胞的分離剋隆效率,原因可能是小鼠ES細胞在生長過程中可能分泌某些重要的細胞因子,從而達到促進綿羊ES細胞增殖的作用.且MEF比SEF更適閤于綿羊類ES細胞的分離和傳代.
본연구이무혈청배양기위기출배양액,지재탐구소서ES세포조건배양액(ESCCM)화2충불동사양층대면양류ES세포분리、극륭효솔적영향.면양내세포단종배태중분리득도후,분별이소서태인성섬유세포(MEF)화면양태인성섬유세포(SEF)위사양층진행배양.결과재MEF사양층상,면양류ES세포재ESCCM신배양계통중가은정전지제10대,이사용기출배양액최다전지5대.이재SEF사양층상,면양류ES세포재ESCCM신배양계통중부능전지3대.표명사용ESCCM화MEF능촉진면양류ES세포적분리화극륭.대류ES세포진행핵형분석、AKP염색급체외분화능력검측,증실소분리적류ES세포부합ES세포적주요특정,이차발현저사류ES세포가이표체배태간세포관건전록인자Nanog.결과표명,ESCCM가현저제고면양류ES세포적분리극륭효솔,원인가능시소서ES세포재생장과정중가능분비모사중요적세포인자,종이체도촉진면양ES세포증식적작용.차MEF비SEF경괄합우면양류ES세포적분리화전대.
