中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2011年
19期
115-120
,共6页
齿兰环斑病毒%外壳蛋白%原核表达%抗血清
齒蘭環斑病毒%外殼蛋白%原覈錶達%抗血清
치란배반병독%외각단백%원핵표체%항혈청
本研究在于探讨侵染兰花的重要病毒之一齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)CP基因的原核表达及其产物抗血清制备技术.从福建省漳州市采集感染齿兰环斑病毒的建兰病样,设计一对特异性引物扩增并克隆得到该病毒的外壳蛋白基因,该基因开放阅读框长477 bp,编码158aa约合18.0 kDa的蛋白质,随后将目的基因插入pET-29a(+)中构建相应的原核表达载体进行诱导表达,目的蛋白经纯化后免疫家兔获得了特异性抗血清.Western blot检测结果表明,抗血清与诱导表达的ORSV外壳蛋白发生特异性反应.间接酶联免疫吸附检测结果表明,抗血清可检测阳性病汁液的最低稀释度达1∶25600 (v/v),最佳工作浓度为1∶12800(v/v),阳性病汁液灵敏度为0.195 mg/mL(w/v),而与TMV等11种同源或异源病毒均无明显的血清学交叉反应.
本研究在于探討侵染蘭花的重要病毒之一齒蘭環斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)CP基因的原覈錶達及其產物抗血清製備技術.從福建省漳州市採集感染齒蘭環斑病毒的建蘭病樣,設計一對特異性引物擴增併剋隆得到該病毒的外殼蛋白基因,該基因開放閱讀框長477 bp,編碼158aa約閤18.0 kDa的蛋白質,隨後將目的基因插入pET-29a(+)中構建相應的原覈錶達載體進行誘導錶達,目的蛋白經純化後免疫傢兔穫得瞭特異性抗血清.Western blot檢測結果錶明,抗血清與誘導錶達的ORSV外殼蛋白髮生特異性反應.間接酶聯免疫吸附檢測結果錶明,抗血清可檢測暘性病汁液的最低稀釋度達1∶25600 (v/v),最佳工作濃度為1∶12800(v/v),暘性病汁液靈敏度為0.195 mg/mL(w/v),而與TMV等11種同源或異源病毒均無明顯的血清學交扠反應.
본연구재우탐토침염란화적중요병독지일치란배반병독(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)CP기인적원핵표체급기산물항혈청제비기술.종복건성장주시채집감염치란배반병독적건란병양,설계일대특이성인물확증병극륭득도해병독적외각단백기인,해기인개방열독광장477 bp,편마158aa약합18.0 kDa적단백질,수후장목적기인삽입pET-29a(+)중구건상응적원핵표체재체진행유도표체,목적단백경순화후면역가토획득료특이성항혈청.Western blot검측결과표명,항혈청여유도표체적ORSV외각단백발생특이성반응.간접매련면역흡부검측결과표명,항혈청가검측양성병즙액적최저희석도체1∶25600 (v/v),최가공작농도위1∶12800(v/v),양성병즙액령민도위0.195 mg/mL(w/v),이여TMV등11충동원혹이원병독균무명현적혈청학교차반응.
