华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2012年
2期
139-146
,共8页
魏晶%毛伟华%林拥军%陈浩
魏晶%毛偉華%林擁軍%陳浩
위정%모위화%림옹군%진호
水稻%组成型启动子%GUS报告基因%GUS染色%GUS定量
水稻%組成型啟動子%GUS報告基因%GUS染色%GUS定量
수도%조성형계동자%GUS보고기인%GUS염색%GUS정량
根据基因芯片数据库和RT-PCR验证得到1个高活性的水稻组成型表达基因(TIGR Locus:LOCOs07g34589),用PCR技术从籼稻品种明恢63基因组中克隆得到其上游启动子PSUI1,长度为1 941 bp;将其与β-glucuronidase( GUS)报告基因融合构建植物表达载体DX2181b-PSUI1,利用玉米Ubiquitin启动子融合GUS报告基因构建表达载体DX2181b-PUb(r)作为对照,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将DX2181b-PSU(I1)和DX2181b-PUbi转化粳稻品种中花11.组织化学染色表明,含DX2181b-PSUI1的转基因植株中,GUS基因在幼苗期叶片、叶鞘、根,抽穗期叶片、叶鞘、茎秆、颖壳、雄蕊和成熟期的叶片、叶鞘、茎秆、胚、胚乳中均有表达,说明PSUT1为组成型启动子.对GUS表达活性进行定量分析表明,PSUI1启动子的活性约为玉米Ubiquitin启动子活性的1/3～1/2,但是PSUI1表现出了更好的表达稳定性.
根據基因芯片數據庫和RT-PCR驗證得到1箇高活性的水稻組成型錶達基因(TIGR Locus:LOCOs07g34589),用PCR技術從秈稻品種明恢63基因組中剋隆得到其上遊啟動子PSUI1,長度為1 941 bp;將其與β-glucuronidase( GUS)報告基因融閤構建植物錶達載體DX2181b-PSUI1,利用玉米Ubiquitin啟動子融閤GUS報告基因構建錶達載體DX2181b-PUb(r)作為對照,通過根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導法將DX2181b-PSU(I1)和DX2181b-PUbi轉化粳稻品種中花11.組織化學染色錶明,含DX2181b-PSUI1的轉基因植株中,GUS基因在幼苗期葉片、葉鞘、根,抽穗期葉片、葉鞘、莖稈、穎殼、雄蕊和成熟期的葉片、葉鞘、莖稈、胚、胚乳中均有錶達,說明PSUT1為組成型啟動子.對GUS錶達活性進行定量分析錶明,PSUI1啟動子的活性約為玉米Ubiquitin啟動子活性的1/3～1/2,但是PSUI1錶現齣瞭更好的錶達穩定性.
근거기인심편수거고화RT-PCR험증득도1개고활성적수도조성형표체기인(TIGR Locus:LOCOs07g34589),용PCR기술종선도품충명회63기인조중극륭득도기상유계동자PSUI1,장도위1 941 bp;장기여β-glucuronidase( GUS)보고기인융합구건식물표체재체DX2181b-PSUI1,이용옥미Ubiquitin계동자융합GUS보고기인구건표체재체DX2181b-PUb(r)작위대조,통과근암농간균(Agrobacterium tumefaciens)개도법장DX2181b-PSU(I1)화DX2181b-PUbi전화갱도품충중화11.조직화학염색표명,함DX2181b-PSUI1적전기인식주중,GUS기인재유묘기협편、협초、근,추수기협편、협초、경간、영각、웅예화성숙기적협편、협초、경간、배、배유중균유표체,설명PSUT1위조성형계동자.대GUS표체활성진행정량분석표명,PSUI1계동자적활성약위옥미Ubiquitin계동자활성적1/3～1/2,단시PSUI1표현출료경호적표체은정성.
