CAJ | 학술논문

目的探讨在体外培养条件下用尼克酰胺、β-细胞调节素(betacellulin)、bFGF、HGF诱导人脐血CD34+细胞向胰岛细胞的分化.方法用磁性细胞分选试剂盒(MACS)分离出CD34+细胞后在含5%FBS,1×ITS,4.7mg/L亚油酸,10-4mol/L 2-磷酸抗坏血酸的低糖型DMEM中培养,扩增后于培养第5d加入尼克酰胺、betacellulin、bFGF、HGF进行诱导,并于诱导14d、24d留取细胞.应用RT-PCR、免疫细胞化学染色方法检测分化细胞中胰岛细胞标志物,并用ELISA方法检测培养液中胰岛素水平.结果流式细胞仪检测结果显示,CD34+细胞的平均分离纯度＞90%,达到分离要求.RT-PCR检测到诱导后的CD34+细胞表达nestin、ngn3、IPF-1 mRNA.免疫细胞化学染色可见诱导的CD34+细胞中出现nestin和insulin阳性表达细胞.胰岛素分泌细胞的分化率平均为(9.8±2.7)%.ELISA检测发现诱导组和未诱导组培养液中的insulin含量有显著性差异(P＜0.01).结论体外联合应用上述因子能诱发脐血CD34+造血干细胞向胰岛素分泌细胞的分化.
목적 탐토재체외배양조건하용니극선알、β-세포조절소(betacellulin)、bFGF、HGF유도인제혈CD34+세포향이도세포적분화.방법 용자성세포분선시제합(MACS)분리출CD34+세포후재함5%FBS,1×ITS,4.7mg/L아유산,10-4mol/L 2-린산항배혈산적저당형DMEM중배양,확증후우배양제5d가입니극선알、betacellulin、bFGF、HGF진행유도,병우유도14d、24d류취세포.응용RT-PCR、면역세포화학염색방법검측분화세포중이도세포표지물,병용ELISA방법검측배양액중이도소수평.결과 류식세포의검측결과현시,CD34+세포적평균분리순도＞90%,체도분리요구.RT-PCR검측도유도후적CD34+세포표체nestin、ngn3、IPF-1 mRNA.면역세포화학염색가견유도적CD34+세포중출현nestin화insulin양성표체세포.이도소분비세포적분화솔평균위(9.8±2.7)%.ELISA검측발현유도조화미유도조배양액중적insulin함량유현저성차이(P＜0.01).결론 체외연합응용상술인자능유발제혈CD34+조혈간세포향이도소분비세포적분화.