华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2012年
3期
281-286
,共6页
拟南芥%水稻%叶绿体血红素加氧酶%原核表达%蛋白质印迹
擬南芥%水稻%葉綠體血紅素加氧酶%原覈錶達%蛋白質印跡
의남개%수도%협록체혈홍소가양매%원핵표체%단백질인적
为研究叶绿体血红素加氧酶HO1的生物学功能和分子作用机制,构建了拟南芥血红素加氧酶基因AtHO1的重组融合蛋白表达载体pET28a-At HO1,质粒转化到Escherichia coli BL21 (DE3)中诱导表达重组蛋白.经SDS-PAGE电泳检测,AtHO1的重组融合蛋白获得了高效表达,分子质量为28～36 ku,且为可溶蛋白.重组蛋白经NPNTA亲和层析法纯化后,得到纯度较高的蛋白.纯化产物免疫新西兰大耳兔获得了专一识别重组蛋白6×His-AtHO1的抗血清,进一步提取拟南芥和水稻叶片总蛋白,蛋白质印迹检测显示,在分子质量28～36 ku之间出现特异性条带,证明用重组蛋白6×His-AtHO1制备的多克隆抗血清可以与拟南芥和水稻HO1蛋白特异性结合,说明拟南芥HO1的抗血清能够用于水稻HO1的功能分析和应用研究.
為研究葉綠體血紅素加氧酶HO1的生物學功能和分子作用機製,構建瞭擬南芥血紅素加氧酶基因AtHO1的重組融閤蛋白錶達載體pET28a-At HO1,質粒轉化到Escherichia coli BL21 (DE3)中誘導錶達重組蛋白.經SDS-PAGE電泳檢測,AtHO1的重組融閤蛋白穫得瞭高效錶達,分子質量為28～36 ku,且為可溶蛋白.重組蛋白經NPNTA親和層析法純化後,得到純度較高的蛋白.純化產物免疫新西蘭大耳兔穫得瞭專一識彆重組蛋白6×His-AtHO1的抗血清,進一步提取擬南芥和水稻葉片總蛋白,蛋白質印跡檢測顯示,在分子質量28～36 ku之間齣現特異性條帶,證明用重組蛋白6×His-AtHO1製備的多剋隆抗血清可以與擬南芥和水稻HO1蛋白特異性結閤,說明擬南芥HO1的抗血清能夠用于水稻HO1的功能分析和應用研究.
위연구협록체혈홍소가양매HO1적생물학공능화분자작용궤제,구건료의남개혈홍소가양매기인AtHO1적중조융합단백표체재체pET28a-At HO1,질립전화도Escherichia coli BL21 (DE3)중유도표체중조단백.경SDS-PAGE전영검측,AtHO1적중조융합단백획득료고효표체,분자질량위28～36 ku,차위가용단백.중조단백경NPNTA친화층석법순화후,득도순도교고적단백.순화산물면역신서란대이토획득료전일식별중조단백6×His-AtHO1적항혈청,진일보제취의남개화수도협편총단백,단백질인적검측현시,재분자질량28～36 ku지간출현특이성조대,증명용중조단백6×His-AtHO1제비적다극륭항혈청가이여의남개화수도HO1단백특이성결합,설명의남개HO1적항혈청능구용우수도HO1적공능분석화응용연구.
