中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2000年
4期
330-335
,共6页
黄庆生%马文煜%姜绍谆%樊英茹%张富泉%肖毅%丁天兵
黃慶生%馬文煜%薑紹諄%樊英茹%張富泉%肖毅%丁天兵
황경생%마문욱%강소순%번영여%장부천%초의%정천병
日本脑炎病毒%感染性RNA%体外转录%全长cDNA
日本腦炎病毒%感染性RNA%體外轉錄%全長cDNA
일본뇌염병독%감염성RNA%체외전록%전장cDNA
本研究根据已知的乙脑病毒(JEV)SA14株基因序列设计一套引物 ,利用长模板RT-PCR 技术,一次扩增出了JEV的全长cDNA,并采用大片段克隆技术将其克隆于载体的RNA聚合酶启动子下游.阳性克隆转录的RNA转染HBK细胞后细胞产生病变,经乳鼠脑内接种及特异性免疫荧光染色证明为JEV,这一结果表明JEV感染性克隆的构建获得了成功.其次,合成一条含有 RNA聚合酶启动子序列的5′引物,利用长模板RT-PCR方法扩增出带有启动子的JEV全长cDNA ,以此cDNA为模板作体外转录.转录产物转染BHK细胞后观察到了典型的JEV病变.收获的病毒经乳鼠脑内接种及免疫荧光染色证明为JEV,从而建立了制备JEV感染性RNA的快捷方法.本研究构建的JEV感染性克隆与建立的长模板RT-PCR快速制备JEV感染性RNA的方法,将为JEV 分子生物学研究的后续工作提供有力的工具和奠定坚实的基础.
本研究根據已知的乙腦病毒(JEV)SA14株基因序列設計一套引物 ,利用長模闆RT-PCR 技術,一次擴增齣瞭JEV的全長cDNA,併採用大片段剋隆技術將其剋隆于載體的RNA聚閤酶啟動子下遊.暘性剋隆轉錄的RNA轉染HBK細胞後細胞產生病變,經乳鼠腦內接種及特異性免疫熒光染色證明為JEV,這一結果錶明JEV感染性剋隆的構建穫得瞭成功.其次,閤成一條含有 RNA聚閤酶啟動子序列的5′引物,利用長模闆RT-PCR方法擴增齣帶有啟動子的JEV全長cDNA ,以此cDNA為模闆作體外轉錄.轉錄產物轉染BHK細胞後觀察到瞭典型的JEV病變.收穫的病毒經乳鼠腦內接種及免疫熒光染色證明為JEV,從而建立瞭製備JEV感染性RNA的快捷方法.本研究構建的JEV感染性剋隆與建立的長模闆RT-PCR快速製備JEV感染性RNA的方法,將為JEV 分子生物學研究的後續工作提供有力的工具和奠定堅實的基礎.
본연구근거이지적을뇌병독(JEV)SA14주기인서렬설계일투인물 ,이용장모판RT-PCR 기술,일차확증출료JEV적전장cDNA,병채용대편단극륭기술장기극륭우재체적RNA취합매계동자하유.양성극륭전록적RNA전염HBK세포후세포산생병변,경유서뇌내접충급특이성면역형광염색증명위JEV,저일결과표명JEV감염성극륭적구건획득료성공.기차,합성일조함유 RNA취합매계동자서렬적5′인물,이용장모판RT-PCR방법확증출대유계동자적JEV전장cDNA ,이차cDNA위모판작체외전록.전록산물전염BHK세포후관찰도료전형적JEV병변.수획적병독경유서뇌내접충급면역형광염색증명위JEV,종이건립료제비JEV감염성RNA적쾌첩방법.본연구구건적JEV감염성극륭여건립적장모판RT-PCR쾌속제비JEV감염성RNA적방법,장위JEV 분자생물학연구적후속공작제공유력적공구화전정견실적기출.
