科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2006年
20期
2373-2380
,共8页
齐向辉%罗兆飞%吴杰群%孟晓蕾%唐悦%韦宇拓%黄日波
齊嚮輝%囉兆飛%吳傑群%孟曉蕾%唐悅%韋宇拓%黃日波
제향휘%라조비%오걸군%맹효뢰%당열%위우탁%황일파
甘油脱水酶%宏基因组%基因置换%理性设计%杂合酶
甘油脫水酶%宏基因組%基因置換%理性設計%雜閤酶
감유탈수매%굉기인조%기인치환%이성설계%잡합매
1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,越来越受到广泛的关注.以弗氏柠檬酸菌和克雷伯氏菌的总DNA以及宏基因组为模板,克隆并表达了3个不同来源的甘油脱水酶基因,前两者均有活力,而后者则没有活力.为了改造甘油脱水酶使其更有利于工业化生产,通过同源建模(homology modeling)构建了这3个甘油脱水酶的三维结构,并利用一些生物信息学软件对这3个甘油脱水酶进行亚基之间的杂合改组(gene swapping)的理性设计,根据设计结果对这3种不同来源的甘油脱水酶的大、中小亚基基因分别进行了克隆.通过基因交换的方法对甘油脱水酶大、中小亚基进行了杂合,得到6种异源亚基杂合酶.部分杂合酶的酸碱稳定性、热稳定性及Vmax得到了明显的改善,同时杂合改组使本没有活力的来源于宏基因组的甘油脱水酶具有了活力而且杂合酶的热稳定性也得到了显著提高.根据构建的三维结构分析了结构差异对酶学性质的影响.
1,3-丙二醇是一種重要的化工原料,越來越受到廣汎的關註.以弗氏檸檬痠菌和剋雷伯氏菌的總DNA以及宏基因組為模闆,剋隆併錶達瞭3箇不同來源的甘油脫水酶基因,前兩者均有活力,而後者則沒有活力.為瞭改造甘油脫水酶使其更有利于工業化生產,通過同源建模(homology modeling)構建瞭這3箇甘油脫水酶的三維結構,併利用一些生物信息學軟件對這3箇甘油脫水酶進行亞基之間的雜閤改組(gene swapping)的理性設計,根據設計結果對這3種不同來源的甘油脫水酶的大、中小亞基基因分彆進行瞭剋隆.通過基因交換的方法對甘油脫水酶大、中小亞基進行瞭雜閤,得到6種異源亞基雜閤酶.部分雜閤酶的痠堿穩定性、熱穩定性及Vmax得到瞭明顯的改善,同時雜閤改組使本沒有活力的來源于宏基因組的甘油脫水酶具有瞭活力而且雜閤酶的熱穩定性也得到瞭顯著提高.根據構建的三維結構分析瞭結構差異對酶學性質的影響.
1,3-병이순시일충중요적화공원료,월래월수도엄범적관주.이불씨저몽산균화극뢰백씨균적총DNA이급굉기인조위모판,극륭병표체료3개불동래원적감유탈수매기인,전량자균유활력,이후자칙몰유활력.위료개조감유탈수매사기경유리우공업화생산,통과동원건모(homology modeling)구건료저3개감유탈수매적삼유결구,병이용일사생물신식학연건대저3개감유탈수매진행아기지간적잡합개조(gene swapping)적이성설계,근거설계결과대저3충불동래원적감유탈수매적대、중소아기기인분별진행료극륭.통과기인교환적방법대감유탈수매대、중소아기진행료잡합,득도6충이원아기잡합매.부분잡합매적산감은정성、열은정성급Vmax득도료명현적개선,동시잡합개조사본몰유활력적래원우굉기인조적감유탈수매구유료활력이차잡합매적열은정성야득도료현저제고.근거구건적삼유결구분석료결구차이대매학성질적영향.
