广东畜牧兽医科技
廣東畜牧獸醫科技
엄동축목수의과기
GUANDONG JOURNAL OF ANIMAL AND VETERINARY SCIENCE
2007年
3期
29-32
,共4页
王步高%曾德年%覃宗华%余劲术%吴彩艳%吕敏娜%蔡建平
王步高%曾德年%覃宗華%餘勁術%吳綵豔%呂敏娜%蔡建平
왕보고%증덕년%담종화%여경술%오채염%려민나%채건평
鸡%B淋巴细胞激活因子(BAFF)%基因克隆%表达
鷄%B淋巴細胞激活因子(BAFF)%基因剋隆%錶達
계%B림파세포격활인자(BAFF)%기인극륭%표체
根据GenBank中收录的鸡B淋巴细胞激活因子(chicken B cell activator factor,ChBAFF)基因序列,设计特异引物,以3周龄鸡法氏囊总PNA为模板,经RT-PCR扩增出ChBAFF的ORF序列,测序后,插入质粒pMAL-c2X,构建重组表达载体,转染到大肠杆菌Rosset(DE3),并以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表明,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的25%,融合蛋白的分子量约为75 ku,所表达重组蛋白主要存在于菌体裂解物上清液中,为可溶性表达.以淀粉树脂柱亲和层析纯化重组蛋白后进行SDS-PAGE,用BandScan软件分析,提纯重组蛋白的含量可达97.5%.MTT比色法分析证明,纯化的重组蛋白可显著刺激鸡脾脏淋巴细胞的活化.
根據GenBank中收錄的鷄B淋巴細胞激活因子(chicken B cell activator factor,ChBAFF)基因序列,設計特異引物,以3週齡鷄法氏囊總PNA為模闆,經RT-PCR擴增齣ChBAFF的ORF序列,測序後,插入質粒pMAL-c2X,構建重組錶達載體,轉染到大腸桿菌Rosset(DE3),併以IPTG誘導錶達,SDS-PAGE分析錶明,重組蛋白的錶達量約佔菌體總蛋白的25%,融閤蛋白的分子量約為75 ku,所錶達重組蛋白主要存在于菌體裂解物上清液中,為可溶性錶達.以澱粉樹脂柱親和層析純化重組蛋白後進行SDS-PAGE,用BandScan軟件分析,提純重組蛋白的含量可達97.5%.MTT比色法分析證明,純化的重組蛋白可顯著刺激鷄脾髒淋巴細胞的活化.
근거GenBank중수록적계B림파세포격활인자(chicken B cell activator factor,ChBAFF)기인서렬,설계특이인물,이3주령계법씨낭총PNA위모판,경RT-PCR확증출ChBAFF적ORF서렬,측서후,삽입질립pMAL-c2X,구건중조표체재체,전염도대장간균Rosset(DE3),병이IPTG유도표체,SDS-PAGE분석표명,중조단백적표체량약점균체총단백적25%,융합단백적분자량약위75 ku,소표체중조단백주요존재우균체렬해물상청액중,위가용성표체.이정분수지주친화층석순화중조단백후진행SDS-PAGE,용BandScan연건분석,제순중조단백적함량가체97.5%.MTT비색법분석증명,순화적중조단백가현저자격계비장림파세포적활화.
