细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
8期
719-722
,共4页
梁淑娟%肖伟玲%牟东珍%吴慧娜%王雪净
樑淑娟%肖偉玲%牟東珍%吳慧娜%王雪淨
량숙연%초위령%모동진%오혜나%왕설정
肝癌细胞%IL-1β%反义RNA%NK细胞%天然免疫
肝癌細胞%IL-1β%反義RNA%NK細胞%天然免疫
간암세포%IL-1β%반의RNA%NK세포%천연면역
目的:构建IL-1β反义RNA真核表达载体, 转染HepG2细胞, 探讨阻断IL-1β作用后对其NK细胞杀伤敏感性的作用.方法:RT-PCR方法扩增两段基因序列IL-1β1(17-331, 315 bp)和IL-1β2(246-505, 260 bp), 经T-A克隆后构建反义RNA表达载体pcDNA3.0-antiIL1β1和pcDNA3.0-antiIL1β2.采用阳离子聚合物(jetPEI)的方法转染HepG2肝癌细胞, RT-PCR方法检测反义RNA的表达水平, 胞内因子染色的方法分析IL-1 的表达水平, MTT方法分析NK-92细胞对HepG2杀伤活性的变化.结果:以LPS刺激的人PBMC总RNA为模板, RT-PCR扩增得到两个约315 bp和260 bp的基因片段, 先构建克隆载体pMD18 T-IL-1β1和pMD18 T-IL-1β2, 质粒PCR、 Xho I酶切和DNA序列分析正确后, 利用Pfu DNA聚合酶进行PCR, 产物纯化后经EcoR I、 Xho I双酶切, 反向插入pcDNA3.0, 获得人IL-1β反义RNA真核表达载体pcDNA3.0-antiIL-1β1和pcDNA3.0-antiIL-1β2.PCR、 Pst I酶切和DNA序列分析正确后, 将其分别转染HepG2细胞, RT-PCR检测显示HepG2细胞能够高水平表达两种反义RNA, 胞内因子染色发现IL-1β的表达水平明显下降, 同时该细胞对NK-92杀伤的敏感性明显升高, 其中IL-1β1反义RNA的作用更为显著, 效靶比10:1时, NK细胞对HepG2的杀伤活性提高了约20%.结论:以促炎性细胞因子IL-1β为靶点进行干预, 能够有效地下调肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗能力.
目的:構建IL-1β反義RNA真覈錶達載體, 轉染HepG2細胞, 探討阻斷IL-1β作用後對其NK細胞殺傷敏感性的作用.方法:RT-PCR方法擴增兩段基因序列IL-1β1(17-331, 315 bp)和IL-1β2(246-505, 260 bp), 經T-A剋隆後構建反義RNA錶達載體pcDNA3.0-antiIL1β1和pcDNA3.0-antiIL1β2.採用暘離子聚閤物(jetPEI)的方法轉染HepG2肝癌細胞, RT-PCR方法檢測反義RNA的錶達水平, 胞內因子染色的方法分析IL-1 的錶達水平, MTT方法分析NK-92細胞對HepG2殺傷活性的變化.結果:以LPS刺激的人PBMC總RNA為模闆, RT-PCR擴增得到兩箇約315 bp和260 bp的基因片段, 先構建剋隆載體pMD18 T-IL-1β1和pMD18 T-IL-1β2, 質粒PCR、 Xho I酶切和DNA序列分析正確後, 利用Pfu DNA聚閤酶進行PCR, 產物純化後經EcoR I、 Xho I雙酶切, 反嚮插入pcDNA3.0, 穫得人IL-1β反義RNA真覈錶達載體pcDNA3.0-antiIL-1β1和pcDNA3.0-antiIL-1β2.PCR、 Pst I酶切和DNA序列分析正確後, 將其分彆轉染HepG2細胞, RT-PCR檢測顯示HepG2細胞能夠高水平錶達兩種反義RNA, 胞內因子染色髮現IL-1β的錶達水平明顯下降, 同時該細胞對NK-92殺傷的敏感性明顯升高, 其中IL-1β1反義RNA的作用更為顯著, 效靶比10:1時, NK細胞對HepG2的殺傷活性提高瞭約20%.結論:以促炎性細胞因子IL-1β為靶點進行榦預, 能夠有效地下調肝癌細胞對NK細胞殺傷的牴抗能力.
목적:구건IL-1β반의RNA진핵표체재체, 전염HepG2세포, 탐토조단IL-1β작용후대기NK세포살상민감성적작용.방법:RT-PCR방법확증량단기인서렬IL-1β1(17-331, 315 bp)화IL-1β2(246-505, 260 bp), 경T-A극륭후구건반의RNA표체재체pcDNA3.0-antiIL1β1화pcDNA3.0-antiIL1β2.채용양리자취합물(jetPEI)적방법전염HepG2간암세포, RT-PCR방법검측반의RNA적표체수평, 포내인자염색적방법분석IL-1 적표체수평, MTT방법분석NK-92세포대HepG2살상활성적변화.결과:이LPS자격적인PBMC총RNA위모판, RT-PCR확증득도량개약315 bp화260 bp적기인편단, 선구건극륭재체pMD18 T-IL-1β1화pMD18 T-IL-1β2, 질립PCR、 Xho I매절화DNA서렬분석정학후, 이용Pfu DNA취합매진행PCR, 산물순화후경EcoR I、 Xho I쌍매절, 반향삽입pcDNA3.0, 획득인IL-1β반의RNA진핵표체재체pcDNA3.0-antiIL-1β1화pcDNA3.0-antiIL-1β2.PCR、 Pst I매절화DNA서렬분석정학후, 장기분별전염HepG2세포, RT-PCR검측현시HepG2세포능구고수평표체량충반의RNA, 포내인자염색발현IL-1β적표체수평명현하강, 동시해세포대NK-92살상적민감성명현승고, 기중IL-1β1반의RNA적작용경위현저, 효파비10:1시, NK세포대HepG2적살상활성제고료약20%.결론:이촉염성세포인자IL-1β위파점진행간예, 능구유효지하조간암세포대NK세포살상적저항능력.
