CAJ | 학술논문

目的:利用分子克隆技术构建原核表达载体pQE-EGFP,在大肠埃希菌中高效表达与鉴定.方法:以质粒pEGFP-N2为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,将其克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定表达蛋白质.结果:PCR扩增得到了EGFP全长结构基因.所构建的pQE-EGFP重组质粒经酶切及测序鉴定结果与设计序列一致;转化大肠埃希菌JM109,经IPTG诱导后,目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE、Western blotting初步测定目的蛋白的相对分子质量约为28 500,与理论预期值一致.结论:pQE-EGFP重组质粒的成功构建、表达和鉴定为TAT-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础.
목적:이용분자극륭기술구건원핵표체재체pQE-EGFP,재대장애희균중고효표체여감정.방법:이질립pEGFP-N2위모판,채용PCR방법특이성확증증강형록색형광단백(EGFP)기인서렬,장기극륭우원핵표체재체pQE-31,소구건적중조질립경측서감정후전화대장애희균JM109,용이병기구기반유당(IPTG)유도표체;십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화Western blotting감정표체단백질.결과:PCR확증득도료EGFP전장결구기인.소구건적pQE-EGFP중조질립경매절급측서감정결과여설계서렬일치;전화대장애희균JM109,경IPTG유도후,목적단백표체솔약위25%;SDS-PAGE、Western blotting초보측정목적단백적상대분자질량약위28 500,여이론예기치일치.결론:pQE-EGFP중조질립적성공구건、표체화감정위TAT-EGFP융합단백천투세포능력적연구전정료기출.