口腔颌面外科杂志
口腔頜麵外科雜誌
구강합면외과잡지
CHINESE JOURNAL OF ORAL AND MAXILLOFACIAL SURGERY
2009年
1期
9-14
,共6页
血管内皮生长因子%基因克隆%基因转染
血管內皮生長因子%基因剋隆%基因轉染
혈관내피생장인자%기인극륭%기인전염
目的:体外构建血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)165的荧光真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达.方法:应用RT-PCR方法从人单核细胞白血病细胞株THP-1中分离、扩增目的片段,单酶切克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构成重组质粒pEGFP-VEGF165,测序验证.通过脂质体介导质粒瞬时转染293T细胞,RT-PCR和免疫细胞化学检测VEGF165的表达.结果:通过RT-PCR获得576 bp的cDNA片段,测序结果与基因库(Genbank)中序列完全一致.转染后经RT-PCR和免疫细胞化学检测证实转染重组质粒组有VEGF165蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到VEGF的表达.结论:本研究构建了人VEGF165荧光真核表达载体pEGFP-VEGF165.并能成功地在293T细胞中表达.
目的:體外構建血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)165的熒光真覈錶達載體,併檢測其在293T細胞中的錶達.方法:應用RT-PCR方法從人單覈細胞白血病細胞株THP-1中分離、擴增目的片段,單酶切剋隆到真覈錶達載體pEGFP-C1中,構成重組質粒pEGFP-VEGF165,測序驗證.通過脂質體介導質粒瞬時轉染293T細胞,RT-PCR和免疫細胞化學檢測VEGF165的錶達.結果:通過RT-PCR穫得576 bp的cDNA片段,測序結果與基因庫(Genbank)中序列完全一緻.轉染後經RT-PCR和免疫細胞化學檢測證實轉染重組質粒組有VEGF165蛋白錶達,而轉染空質粒組及未轉染組沒有檢測到VEGF的錶達.結論:本研究構建瞭人VEGF165熒光真覈錶達載體pEGFP-VEGF165.併能成功地在293T細胞中錶達.
목적:체외구건혈관내피생장인자(vascular endothelial growth factor,VEGF)165적형광진핵표체재체,병검측기재293T세포중적표체.방법:응용RT-PCR방법종인단핵세포백혈병세포주THP-1중분리、확증목적편단,단매절극륭도진핵표체재체pEGFP-C1중,구성중조질립pEGFP-VEGF165,측서험증.통과지질체개도질립순시전염293T세포,RT-PCR화면역세포화학검측VEGF165적표체.결과:통과RT-PCR획득576 bp적cDNA편단,측서결과여기인고(Genbank)중서렬완전일치.전염후경RT-PCR화면역세포화학검측증실전염중조질립조유VEGF165단백표체,이전염공질립조급미전염조몰유검측도VEGF적표체.결론:본연구구건료인VEGF165형광진핵표체재체pEGFP-VEGF165.병능성공지재293T세포중표체.
