国际遗传学杂志
國際遺傳學雜誌
국제유전학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF GENETICS
2007年
3期
169-172
,共4页
马洪星%栗亚%张宇雯%李冀宏%刘岩%刘远莉%李丹%刘兴汉
馬洪星%慄亞%張宇雯%李冀宏%劉巖%劉遠莉%李丹%劉興漢
마홍성%률아%장우문%리기굉%류암%류원리%리단%류흥한
肿瘤抑素%RGD序列%基因重组%纯化
腫瘤抑素%RGD序列%基因重組%純化
종류억소%RGD서렬%기인중조%순화
目的 构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽(T21RGD)-内含肽-几丁质结合蛋白融合表达载体,实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化.方法 人工设计合成T21RGD肽基因,经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2,酶切和测序鉴定正确后转化入大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导其融合表达,对表达蛋白进行几丁质珠亲和层析,DTT诱导柱上裂解以获得T21RGD肽.经Trcine-SDS-PAGE和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对纯化产物进行鉴定.结果 质粒酶切和测序结果显示,含T21RGD肽基因按正确方向和序列插入质粒,融合蛋白表达量达菌体蛋白总量的50%以上,Trcine-SDS-PAGE显示了T21RGD肽目的条带与预期相符,反相高效液相色谱测定峰纯度达97%.结论 成功构建T21RGD肽融合表达载体,实现了融合蛋白在大肠杆菌中高效表达和T21RGD肽几丁质珠亲和层析一步纯化,为进一步研究T21RGD肽抗肿瘤活性和作用机制奠定基础.
目的 構建引入RGD序列人腫瘤抑素相關21肽(T21RGD)-內含肽-幾丁質結閤蛋白融閤錶達載體,實現目的肽的幾丁質珠親和層析一步純化.方法 人工設計閤成T21RGD肽基因,經重組定嚮剋隆插入到原覈錶達載體pTYB2,酶切和測序鑒定正確後轉化入大腸桿菌B121(DE3),IPTG誘導其融閤錶達,對錶達蛋白進行幾丁質珠親和層析,DTT誘導柱上裂解以穫得T21RGD肽.經Trcine-SDS-PAGE和反相高效液相色譜(RP-HPLC)對純化產物進行鑒定.結果 質粒酶切和測序結果顯示,含T21RGD肽基因按正確方嚮和序列插入質粒,融閤蛋白錶達量達菌體蛋白總量的50%以上,Trcine-SDS-PAGE顯示瞭T21RGD肽目的條帶與預期相符,反相高效液相色譜測定峰純度達97%.結論 成功構建T21RGD肽融閤錶達載體,實現瞭融閤蛋白在大腸桿菌中高效錶達和T21RGD肽幾丁質珠親和層析一步純化,為進一步研究T21RGD肽抗腫瘤活性和作用機製奠定基礎.
목적 구건인입RGD서렬인종류억소상관21태(T21RGD)-내함태-궤정질결합단백융합표체재체,실현목적태적궤정질주친화층석일보순화.방법 인공설계합성T21RGD태기인,경중조정향극륭삽입도원핵표체재체pTYB2,매절화측서감정정학후전화입대장간균B121(DE3),IPTG유도기융합표체,대표체단백진행궤정질주친화층석,DTT유도주상렬해이획득T21RGD태.경Trcine-SDS-PAGE화반상고효액상색보(RP-HPLC)대순화산물진행감정.결과 질립매절화측서결과현시,함T21RGD태기인안정학방향화서렬삽입질립,융합단백표체량체균체단백총량적50%이상,Trcine-SDS-PAGE현시료T21RGD태목적조대여예기상부,반상고효액상색보측정봉순도체97%.결론 성공구건T21RGD태융합표체재체,실현료융합단백재대장간균중고효표체화T21RGD태궤정질주친화층석일보순화,위진일보연구T21RGD태항종류활성화작용궤제전정기출.
