生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2003年
4期
6-8
,共3页
翁康生%廖萍%周名权%吕小枫%陆晔%刘国星
翁康生%廖萍%週名權%呂小楓%陸曄%劉國星
옹강생%료평%주명권%려소풍%륙엽%류국성
幽门螺杆菌%尿素酶%低温培养%表达%纯化
幽門螺桿菌%尿素酶%低溫培養%錶達%純化
유문라간균%뇨소매%저온배양%표체%순화
目的:建立经济有效的方法,从大肠杆菌表达、纯化重组幽门螺杆菌尿素酶A、B亚单位.方法:含重组表达质粒pGEX-2T/ureA,pGEX-2T/ureB大肠杆菌分别在不同浓度IPTG、不同温度条件下作诱导培养,以SDS-PAGE分析表达产物,采用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析分离纯化表达产物,以Western-blotting和ELISA对纯化产物作抗原性分析鉴定.结果:IPTG诱导浓度为0.1mmol/L;诱导温度为28℃,含重组质粒大肠杆菌表达可溶性融合蛋白GST-ureA、GST-ureB各约占总表达产物的78%和87%.经亲和层析,得纯度90%以上的GST-ureA约为14mg/L,GST-ureB约为18mg/L;融合蛋白呈ureA、ureB抗原性反应.结论:建立了低温诱导及纯化高纯度ureA、ureB基因表达产物的方法,所得纯化产物具有ureA、ureB抗原活性,为进一步的应用研究打下基础.
目的:建立經濟有效的方法,從大腸桿菌錶達、純化重組幽門螺桿菌尿素酶A、B亞單位.方法:含重組錶達質粒pGEX-2T/ureA,pGEX-2T/ureB大腸桿菌分彆在不同濃度IPTG、不同溫度條件下作誘導培養,以SDS-PAGE分析錶達產物,採用穀胱甘肽-Sepharose 4B親和層析分離純化錶達產物,以Western-blotting和ELISA對純化產物作抗原性分析鑒定.結果:IPTG誘導濃度為0.1mmol/L;誘導溫度為28℃,含重組質粒大腸桿菌錶達可溶性融閤蛋白GST-ureA、GST-ureB各約佔總錶達產物的78%和87%.經親和層析,得純度90%以上的GST-ureA約為14mg/L,GST-ureB約為18mg/L;融閤蛋白呈ureA、ureB抗原性反應.結論:建立瞭低溫誘導及純化高純度ureA、ureB基因錶達產物的方法,所得純化產物具有ureA、ureB抗原活性,為進一步的應用研究打下基礎.
목적:건립경제유효적방법,종대장간균표체、순화중조유문라간균뇨소매A、B아단위.방법:함중조표체질립pGEX-2T/ureA,pGEX-2T/ureB대장간균분별재불동농도IPTG、불동온도조건하작유도배양,이SDS-PAGE분석표체산물,채용곡광감태-Sepharose 4B친화층석분리순화표체산물,이Western-blotting화ELISA대순화산물작항원성분석감정.결과:IPTG유도농도위0.1mmol/L;유도온도위28℃,함중조질립대장간균표체가용성융합단백GST-ureA、GST-ureB각약점총표체산물적78%화87%.경친화층석,득순도90%이상적GST-ureA약위14mg/L,GST-ureB약위18mg/L;융합단백정ureA、ureB항원성반응.결론:건립료저온유도급순화고순도ureA、ureB기인표체산물적방법,소득순화산물구유ureA、ureB항원활성,위진일보적응용연구타하기출.
