表达人内啡肽的腺病毒/腺相关杂合病毒的构建及体外表达分析
표체인내배태적선병독/선상관잡합병독적구건급체외표체분석
Construction and analysis of in vitro expression of Adenovirus/Adeno-associated hybrid virus containing the fusion gene of human β-endorphin
  • 万方数据
    微生物学报 미생물학보
    ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
    2005年 6期 856-859 ,共4页

    徐学武%俞卫锋%崔贞福%王星华%李泉%吴飞翔%董刚%姜梨华

    서학무%유위봉%최정복%왕성화%리천%오비상%동강%강리화

    β-内啡肽%腺病毒%腺相关病毒%杂合病毒%构建%表达 β-內啡肽%腺病毒%腺相關病毒%雜閤病毒%構建%錶達
    β-내배태%선병독%선상관병독%잡합병독%구건%표체
    应用分子生物学方法将人β-内啡肽融合基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC312-AAVEE,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含转基因腺病毒/腺相关杂合病毒Ad/AAV-EE.用PCR方法对杂合病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度.杂合病毒感染体外培养细胞观察转基因表达,ELISA法测定培养液中表达产物浓度.PCR法证实转基因正确插入了杂合病毒基因组内,且没有野生型病毒污染,病毒滴度为1.29×1010PFU/mL.结果表明转基因从第1天到第14天的表达水平呈上升趋势,第14天达到3141pg/mL.
    응용분자생물학방법장인β-내배태융합기인서렬극륭입선병독천사질립pDC312-AAVEE,후자여골가질립공전염HEK293세포,포장득도함전기인선병독/선상관잡합병독Ad/AAV-EE.용PCR방법대잡합병독진행감정,TCID50법측정병독적도.잡합병독감염체외배양세포관찰전기인표체,ELISA법측정배양액중표체산물농도.PCR법증실전기인정학삽입료잡합병독기인조내,차몰유야생형병독오염,병독적도위1.29×1010PFU/mL.결과표명전기인종제1천도제14천적표체수평정상승추세,제14천체도3141pg/mL.
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