生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
4期
567-571
,共5页
姚婷婷%王衍敏%顾建龙%王正祥
姚婷婷%王衍敏%顧建龍%王正祥
요정정%왕연민%고건룡%왕정상
黑曲霉%糖化酶%基因克隆%染色体整合%摇瓶发酵
黑麯黴%糖化酶%基因剋隆%染色體整閤%搖瓶髮酵
흑곡매%당화매%기인극륭%염색체정합%요병발효
以工业生产菌株黑曲霉CICIM F0410基因组DNA为模板,扩增出糖化酶glaA基因,测序并进行表达研究.GlaA基因的核苷酸序列长为2167 bp,包含4个内含子.氨基酸序列比对表明此黑曲霉糖化酶与其他曲霉属来源的糖化酶有很高的同源性.将glaA基因克隆到pBC-Hygro载体中,构建重组质粒pBC-Hygro-glaA并转化A.niger F0410.携多拷贝glaA的转化子用150μg/mL潮霉素抗性筛选并通过荧光实时定量PCR鉴定.结果表明,在染色体整合2～3倍糖化酶基因对糖化酶的过量合成是适宜的,有助于提高糖化酶活力.对转化子进行摇瓶发酵研究,发酵终止时转化子GB0506的糖化酶活力比出发菌株F0410提高了17.5%.因此,增加黑曲霉染色体糖化酶基因的拷贝数可以显著提高糖化酶活力.
以工業生產菌株黑麯黴CICIM F0410基因組DNA為模闆,擴增齣糖化酶glaA基因,測序併進行錶達研究.GlaA基因的覈苷痠序列長為2167 bp,包含4箇內含子.氨基痠序列比對錶明此黑麯黴糖化酶與其他麯黴屬來源的糖化酶有很高的同源性.將glaA基因剋隆到pBC-Hygro載體中,構建重組質粒pBC-Hygro-glaA併轉化A.niger F0410.攜多拷貝glaA的轉化子用150μg/mL潮黴素抗性篩選併通過熒光實時定量PCR鑒定.結果錶明,在染色體整閤2～3倍糖化酶基因對糖化酶的過量閤成是適宜的,有助于提高糖化酶活力.對轉化子進行搖瓶髮酵研究,髮酵終止時轉化子GB0506的糖化酶活力比齣髮菌株F0410提高瞭17.5%.因此,增加黑麯黴染色體糖化酶基因的拷貝數可以顯著提高糖化酶活力.
이공업생산균주흑곡매CICIM F0410기인조DNA위모판,확증출당화매glaA기인,측서병진행표체연구.GlaA기인적핵감산서렬장위2167 bp,포함4개내함자.안기산서렬비대표명차흑곡매당화매여기타곡매속래원적당화매유흔고적동원성.장glaA기인극륭도pBC-Hygro재체중,구건중조질립pBC-Hygro-glaA병전화A.niger F0410.휴다고패glaA적전화자용150μg/mL조매소항성사선병통과형광실시정량PCR감정.결과표명,재염색체정합2～3배당화매기인대당화매적과량합성시괄의적,유조우제고당화매활력.대전화자진행요병발효연구,발효종지시전화자GB0506적당화매활력비출발균주F0410제고료17.5%.인차,증가흑곡매염색체당화매기인적고패수가이현저제고당화매활력.
